外周血單個核細胞可應用于： （1）免疫學（包括自身免疫性疾病），傳染病，血液系統惡性腫瘤，疫苗開發，移植免疫學研究； （2）預測藥物和異生素免疫抑制作用； （3）高通量篩選
本實驗來自「精編免疫學實驗指南」作者：J.E.科利根等,譯者：曹雪濤等，
| 實驗方法原理 | FicoH-Hypaque（又稱淋巴細胞分層液）梯度離心法是一種單次密度梯度離心分離法。
實驗采用FicoH-Hypaque分層液。蔗糖聚合物稱聚蔗糖（商品名為Ficoll），分子量為40kD，具有高密度、低滲透壓、無毒性的特點。高濃度的Ficoll溶液粘性高，易使細胞聚集，使用60g/L的低濃度Ficoll溶液，添加泛影葡胺（urografin）（國外常用商品Isopaque或Hypaque，故又稱Ficoll-Hypaque分層液），可配制成密度合適分層液。
因為人的紅細胞密度為1.093，粒細胞密度為1.092，單個核細胞在1.076——1.090之間，所以密度為1.077±0.001的分層液最佳。
分離時各種血液成分將按密度梯度重新聚集。血漿和血小板由于密度較低，故懸浮于分層液的上部，而紅細胞與粒細胞密度較大，沉于分層液底部。外周血單個核細胞（PBMC）密度稍低于分層液，故位于分層液界面上，這樣就可以得到PBMC。
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| 實驗材料 | 肝素抗凝血或肝素化的臍帶血 |
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| 試劑、試劑盒 | PBS聚蔗糖-泛影葡胺溶液HBSS磷酸緩沖鹽溶液淋巴細胞分層液 |
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| 儀器、耗材 | 刻度離心管吸管試管毛細吸管橡皮乳頭載玻片蓋玻片水平式離心機 |
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| 實驗步驟 | 1.靜脈取血2ml，加入含肝素溶液（10——50u/ml血樣本）的試管中，混勻，使血抗凝。用PH7.2的Hanks液將抗凝血稀釋一倍。
2.吸取2ml淋巴細胞分層液置于刻度離心管中，將離心管傾斜45°角，用毛細滴管將稀釋的全血沿管壁緩慢加至分離液上面，應注意保持液面清晰。
3.在18℃——20℃下，用水平離心機以2000r/min離心20min。
4.用毛細吸管輕輕插入混濁帶，沿管壁輕輕吸出單個核細胞層的細胞，移入另一支離心管中。避免吸取過多的分層液或血漿。
5.用Hanks液洗滌細胞3次，第1次2000r/min,進行10min。第2——3次1500r/min,進行10min。可去除大部分混雜的血小板。
6.將沉淀細胞懸于培養基中備用。 展開 |
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| 注意事項 | 1.實驗所用玻璃器皿應該潔凈。如果制備的單個核細胞懸液用于細胞培養時，上述操作過程都要在無菌條件下進行，所用器材，試劑都應為無菌。
2.實驗中的細胞獲得率與室溫及分層液比重等有關，分層液應避光4℃保存。
3.往淋巴細胞分層液中加入稀釋全血時，不得將血液沖入分層液中，需保持兩層液體的清晰界面。 |
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| 其他 | 此法分離PBMC純度可達95%，淋巴細胞約占90%，其中T淋巴細胞占80%，B淋巴細胞占4%~10%。
本實驗來自《精編免疫學實驗指南》作者：J.E.科利根等,譯者：曹雪濤等。
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