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  • 發布時間:2021-10-20 15:44 原文鏈接: 外泌體與蛋白比較,分子質量誰大

    1.凝膠過濾法 凝膠過濾法分離蛋白質的原理是根據蛋白質分子量的大小。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍,在此范圍內,分子量的對數和洗脫體積之間成線性關系。因此,用幾種已知分子量的蛋白質為標準,進行凝膠層析,以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數作圖,繪制出標準洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行凝膠層析,根據其所用的洗脫體積,從標準洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量。
    2.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法 蛋白質在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。SDS(十二烷基磺酸鈉)是一種去污劑,可使蛋白質變性并解離成亞基。當蛋白質樣品中加入SDS后,SDS與蛋白質分子結合,使蛋白質分子帶上大量的強負電荷,并且使蛋白質分子的形狀都變成短棒狀,從而消除了蛋白質分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。這樣電泳的速度只取決于蛋白質分子量的大小,蛋白質分子在電泳中的相對遷移率和分子質量的對數成直線關系。以標準蛋白質分子質量的對數和其相對遷移率作圖,得到標準曲線,根據所測樣品的相對遷移率,從標準曲線上便可查出其分子質量。
    3.沉降法(超速離心法) 沉降系數(S)是指單位離心場強度溶質的沉降速度。S也常用于近似地描述生物大分子的大小。蛋白質溶液經高速離心分離時,由于比重關系,蛋白質分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質顆粒大小成正比,應用光學方法觀察離心過程中蛋白質顆粒的沉降行為,可判斷出蛋白質的沉降速度。根據沉降速度可求出沉降系數,將S帶入公式,即可計算出蛋白質的分子質量。質的沉降速度。S也常用于近似地描述生物大分子的大小。蛋白質溶液經高速離心分離時,由于比重關系,蛋白質分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質顆粒大小成正比,應用光學方法觀察離心過程中蛋白質顆粒的沉降行為,可判斷出蛋白質的沉降速度。根據沉降速度可求出沉降系數,將S帶入公式,即可計算出蛋白質的分子質量。

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