外泌體微泡非特異性標志物總結分析

外泌體微泡作為細胞間信號傳導的重要媒介，越來越多的研究揭示其作為重大疾病生物標志物的臨床價值。當前外泌體微泡快速，高通量，多參數的主流分析方法仍為流式分析法。流式分析法主要依賴散射光或者熒光設定分析閾值，劃門分析。然而由于外泌體微泡體積遠小于細胞，散射光信號弱，傳統流式散射光檢測靈敏度低，需借助熒光標記才可分析外泌體微泡。其中，非特異熒光標記為外泌體微泡總量分析較為普遍的方法

近日de Rond等人系統研究適合外泌體微泡非特異標記的理想標志物，詳細分析Calcein AM，  Calcein violet，  CFSE，  Di-8-ANEPPS和Lactadherin（另外，因Annexin V和Lactadherin同樣結合膜磷脂成分，并且依賴于鈣離子，無法適用于血液等樣品直接標記，膜磷脂結合效率遠低于Lactadherin，故不在此研究范圍內）等不同類型標記物。因不同標志物標記外泌體微泡效率明顯不同，并且對蛋白質聚集體，脂蛋白，細胞碎片等物質的干擾敏感性不同，其效能比較分析需要非常嚴格的對比信息方有意義。de Rond等人首次借用Apogee納米流式超高的散射光靈敏度和分辨率，作為不同標志物標記效能分析的參考標準，結合MCF7細胞上清和血小板外泌體微泡樣本，詳細比較了上述5種標志物識別外泌體微泡的效能情況。

研究統計發現，Di-8-ANEPPS, Lactadherin和超靈敏散射光可以檢測到100% 的EpCAM+ MCF7 外泌體微泡（圖1）；Lactadherin和超靈敏散射光可分別檢測到33%和d 61% 的血小板 CD61+外泌體微泡（圖2）。只有在血小板蛋白質雜志去除后，Di-8-ANEPPS才可以特異識別結合外泌體微泡。Calcein AM，  Calcein violet和 CFSE則是檢測靈敏度相對較差或極易引起集群檢測問題的標志物。因此，截止目前還沒有能夠同時滿足：標記所有外泌體微泡，特異性足夠高，與抗體標記兼容，適用生物體液樣本直接標記，標記檢測時間低于8小時等條件的非特異標志物。 然而，該研究也反映出針對不同外泌體微泡樣品，選擇合適的熒光標志物，結合Apogee納米流式超靈敏散射光，仍會是當前外泌體微泡流式分析的最佳選擇，快速，精準，可靠。 

圖1，EpCAM+ MCF7 外泌體微泡散射光和熒光標志物流式分析

圖2，血小板外泌體微泡散射光和熒光標志物流式分析

參考文獻

de Rond, Leonie, et al. "Comparison of Generic Fluorescent Markers for Detection of Extracellular Vesicles by Flow Cytometry." Clinical chemistry 64.4 (2018): 680-689.