1.外泌體鑒定的方法有哪些？
1）透射電子顯微鏡（TEM）。
2）Nanosight粒徑分析（NTA）。
3）Western blot鑒定。
2.納米流式可以提供哪些檢測服務？
1）納米流式可以作為普通 NTA，檢測外泌體的粒徑和粒子濃度。
2）可以對外泌體進行標記后，通過激光進行熒光信號的激發，從而進行熒光層面 的檢測，例如通過 FITC 熒光抗體標記外泌體 CD63，檢測外泌體 CD63 的粒子數，從而統計 CD63 的陽性率。
3.外泌體標志性蛋白是外泌體上獨有的么？
不是。這些標志物蛋白其實主要是涉及到了囊泡的形成和分泌過程，多數是膜蛋白或者是 ESCRT復合體成員及其相關蛋白，他們產生于細胞中，定位于胞內的膜結構附近，因此細胞中自然也會存在。只是因為外泌體的形成依賴于這些分子，因此這些分子在囊泡中發揮功能，因此在囊泡中豐度要明顯比細胞中更高一些。
4.提取的外泌體進行Western Blot前是否需要加入RIPA試劑裂解？
不需要，外泌體在wb之前的制樣過程中有煮樣步驟，該操同樣會對外泌體有裂解效果。
5.WB實驗會有陽參樣本的設置嗎？
我們會在一張膜上設置1個陽參樣本，不會針對每個客戶的項目都設置陽參。如果客戶有需求，一般我們有超離制備的細胞上清外泌體作為陽參樣本，陽參的設置主要是為了評估實驗體系是否成功，排除由于人為操作引起實驗失敗。
6.做透射電鏡的注意事項有哪些？
1）樣品純度越高，TEM結果越好；
2）不同體液來源、不同分離方法得到的EVs稀釋倍數有所不同；
3）鹽結晶會影響樣品導電率，負染前用DI水清洗銅網上的EVs；
4）拍攝電鏡圖片時，要注意將外泌體與其他顆粒區分開。
7.電鏡的染色方法是什么？
一般是負染法，使用的試劑主要是醋酸雙氧鈾，效果較好。
8.外泌體電鏡是不是一定要有膜結構，無膜結構的球體對不對？
負染電鏡結果中外泌體的形態肯定是那種明顯的茶托樣或者大餅樣的，邊緣有一圈略微更明亮的亮圈。如果打到的結構是沒有膜結構的圓球形，那么很可能是脂蛋白顆粒或者抱團的蛋白質。
9.超速收集上的外泌體，電鏡下沒有找到外泌體的原因可能是什么？
超速離心提取外泌體的量低于外泌體沉淀試劑提取，而且本身細胞培養上清中外泌體的含量很低，所以分離出來的外泌體不容易找到，在進行電鏡檢測的時候可以減少稀釋倍數甚至是濃縮外泌體懸液后再進行檢測。