案例2：外泌體lncRNA促進腎癌腫瘤細胞耐藥性
腫瘤學頂級期刊Cancer Cell（IF：27.409）發表文章，闡述了疾病相關lncRNA參與腎癌耐藥性及通過外泌體傳播的生理機制，將外泌體lncRNA的研究又一次帶到了大眾視野中。首先作者通過高通量手段檢測了野生型細胞和耐藥型細胞中差異表達的lncRNA，并通過病人源性異種移植模型(PDX)鑒定到8條疑似致病lncRNA。將其中一條lncRNA-lncARSR (Activated in RCC with Sunitinib Resistance)敲除后，細胞耐藥性顯著增強。進一步研究表明lncARSR與腎癌細胞增殖、粘附等表型密切相關。作者研究發現，lncARSR主要存在于細胞外泌體中，并且耐藥細胞外泌體lncRNA含量要遠高于野生型細胞。作者隨后通過RNA Pull Down實驗證實核不均一性核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)負責包埋lncARSR進入外泌體。當提取耐藥細胞外泌體孵育到野生型細胞后，野生型細胞胞內lncARSR含量增加，細胞耐藥性增強。而胞內lncARSR主要發揮miRNA海綿功能，通過競爭性結合miRNA-34和miRNA-449，促進AXL和c-MET表達及下游STAT3、AKT、ERK信號通路的活化，最終導致舒尼替尼耐藥性形成。
原文：Exosome-Transmitted lncARSR Promotes Sunitinib Resistance in Renal Cancer by Acting as a Competing Endogenous RNA
案例3:大腦創傷小鼠腦組織來源外泌體環狀RNA表達
大腦創傷（TBI）具有極高的發病率和致死率，不同程度危害身體健康，目前對其致病機理，尤其是對神經系統造成傷害的分子機制尚不知曉。已知外泌體中富含環狀RNA，一類新發現的環形非編碼RNA，多數以miRNA海綿機制調控下游功能基因的表達。近日，Journal of Neurotrauma（IF=5.190）發表文章，研究了大腦創傷小鼠模型腦組織來源外泌體環狀RNA的表達圖譜，并對其功能進行了預測。作者首先分離小鼠腦組織，提取腦周質外泌體，依托二代高通量測序技術手段，進行了外泌體全轉錄組測序。作者共發現231個差異表達的環狀RNA，155個上調，76個下調。通過GO及KEGG分析對其中外泌體環狀RNA進行了功能預測。GO分析表明這些RNA分子主要參與神經損傷修復，神經系統發育及神經信號傳導相關，這些分子同時主要富集在cGMP-PKG信號通路。CircRNA-miRNA互作網絡圖揭示了環狀RNA作用靶miRNA及可能的功能。本文首次研究了大腦創傷外泌體中環狀RNA變化，為后續分子機理詳細研究提供諸多靶分子。
原文：Circular RNA expression alteration in exosomes from the brain extracellular space after traumatic brain injury in mice
針對上述優秀的研究文章，小編進行了一番總結，梳理了幾條外泌體研究思路，希望可以給各位老師一些幫助。首先，從大范圍來看，外泌體研究也可以分為三大思路，表達譜、分子標志物及分子機制方向。這三類研究均依托高通量測序揭示外泌體攜帶RNA分子對細胞功能造成影響。機制方向比較特殊，一種思路是直接研究差異外泌體RNA對細胞造成影響及分子功能；而另一種思路是將外泌體與研究細胞共培養后，對共培養及單獨培養細胞進行測序，從而找到外泌體具體作用目的細胞靶基因。
三 云序生物外泌體研究最優選
云序生物外泌體服務總流程
云序生物提供外泌體一站式服務流程，客戶只需提供樣品（血清、血漿、體液、細胞上清等），云序生物完成從外泌體抽提到后續測序分析所有服務。后續我們不僅為客戶提供海量數據，更為客戶甄別有效數據，提供出版級別經典圖片。
云序生物外泌體提取服務
云序生物外泌體抽提均采用成熟商業試劑盒（Qiagen）抽提，在保證抽提外泌體質量及外泌體RNA濃度的情況下，最大程度保證提取樣品均一性。云序生物針對不同客戶需求有兩類外泌體抽提服務方案。
一步法：一步到位，從血清、血漿、尿液、細胞上清等樣品中直接抽提外泌體RNA。該方法省去單獨提取外泌體的步驟，可以最大程度節省樣本，得到高豐度RNA，滿足測序要求。
兩步法：該方法先從樣本中富集外泌體，可進行外泌體鑒定等服務；之后再從外泌體中提取RNA進行測序，該方法樣本損失較大，但可對富集的外泌體進行鑒定。
電鏡鑒定
外泌體在電鏡下具有非常明顯單層膜結構，30-100nm大小不一的茶托樣結構（通常為茶托型或一側凹陷的半球形）。
外泌體Western Blot鑒定
外泌體表面CD63、 CD9、TSG101 標記通過 western blot鑒定。
云序生物外泌體高通量篩選服務
云序生物提供市面上最全的外泌體檢測服務，包括編碼RNA及非編碼RNA，以及外泌體包裹蛋白質組，云序生物均可提供一站式檢測服務。
四 申請外泌體國自然小建議
開篇提到2018國自然申請馬上截止，小編希望在這千鈞一發之際這篇文章對各位老師有些微幫助。
1很多老師懷疑自己養的細胞能不能做外泌體研究，其實不用擔心，外泌體已知是細胞之間傳遞信息的信使，細胞沒有獨立存在的，任何表型的改變（腫瘤侵襲，干細胞修復，組織再生，胚胎發育等）都是經過細胞傳遞，外泌體介導的。
2外泌體課題如何設計，如何顯得新穎？物以稀為貴，科研亦是如此，外泌體國內研究起步較晚，本身就屬于開拓階段，越早進行外泌體RNA（蛋白質）表達譜分析越有利，有了表達譜數據的支撐，也便于盡早開展外泌體機制實驗，有了這些數據作為硬實力保障，國自然申請必然不是難事。