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  • 發布時間:2020-09-14 17:27 原文鏈接: 多克隆抗體技術概述2

    (3)脂質體:是人工制備的類脂質的小球體,由一個或多個酷似細胞膜的類脂雙分子層組成,這種結構使其能夠攜帶各種親水的、疏水的和兩性物質,他們被包裹在脂質體內部的水相中,或插入類脂雙分子層或吸附、聯接在脂質體的表面,起到明顯的免疫增強作用。
     
    (4)油佐劑:采用植物油和礦物油均可,包括豆油、花生油、油菜油等。目前應用最廣的礦物油。
     
    10號白油(石蠟油) 100ml
     
    硬脂酸鋁2g
     
    司本80 6ml
     
    混合加熱融化,分裝。用時按下列配方進行乳化。
     
    油相3份
     
    水相(加4%吐溫-80) 1份
     
    先把油相攪拌起來,然后緩慢加入水相乳化。司本是油分散劑,吐溫是水分散劑,均有利于乳化。
     
    2、乳化將抗原與佐劑混合的過程稱為乳化。乳化的方法很多,可采用研缽乳化;可直接在旋渦振蕩器上乳化;可用組織搗碎器乳化。少量時,特別是弗氏佐劑與抗原乳化時,常采用注射器乳化,用兩個注射器,一個吸入抗原液,一個吸入佐劑,兩注射器頭以膠管連接,注意一定扎緊,然后來回抽吸。當大量乳化時,可采用膠體磨進行。
     
    乳化好的標志是取一滴乳化劑滴入水中呈現球形而不分散。如出現平展擴散即為未乳化好。乳化過的物質放置一段時間(在保存期內)出現油水分層也是未乳化好的表現。
     
    根據抗原的性質、免疫原性和動物的免疫反應性來決定免疫途徑、免疫次數和間隔時間等。
     
    免疫途徑包括皮下注射、皮內注射、肌肉注射、靜脈注射、腹腔注射以及淋巴結內注射等。抗原量少,則一般多采用加佐劑,淋巴結內或淋巴結周圍、或足掌、或皮內、皮下多點注射,如抗原量多,則可采用皮下、肌肉、以至靜脈注射。
     
    注射間隔時間帶佐劑的皮內、皮下注射,一般為間隔2~4周免疫一次。不帶佐劑的皮下或肌肉注射,一般為1~2周間隔時間;肌肉或靜脈免疫的,可5天左右的間隔時間。
     
    可以把各種注射途徑聯合起來應用,最終以達到效價要求為目的。
     
    四、抗體的鑒定
     
    1、抗體的效價鑒定不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應、瓊脂擴散試驗、酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
     
    2、抗體的特異性鑒定抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,并按下列公式計算交叉反應率。

     
    如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質的交叉反應率近似為0,即該血清的特異性較好。
     
    3、抗體的親和力是指抗體和抗原結合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結合位點與抗原決定簇之間立體構型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復合物穩定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數K表示,K的單位是 L/mol,通常K的范圍在108~1010/mol,也有多達1014/mol。抗體親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
     
    五、抗血清的凍存
     
    抗血清收獲后,加1/萬硫柳汞或1/萬的疊氮鈉防腐,或加入等量的中性甘油,分裝小瓶,置-20℃以下的低溫保存,數月至數年內抗體效價無明顯變化。注意避免反復凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存。


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