多功能酶標儀的選擇要素（一）

近年來，隨著多功能酶標儀在國內各高校實驗室逐漸推廣開來，多功能酶標儀品牌和型號也逐漸多了起來，亂花漸欲迷人眼。除了三大傳統優勢品牌PE、MD和TECAN，還出現了眾多后來者插足此市場，如收購了芬蘭雷勃的Thermo、從發光起家的Berthold、針對藥篩領域的BMG以及新興的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一個甚至多個系列產品線，特性各不相同，選購時各種技術參數、技術指標令人眼花繚亂
　　
本文嘗試從用戶實際使用的角度，探討應該如何看待花樣繁多的參數特性，希望能幫助大家找到真正合適自己的多功能酶標儀。
　　
一、濾片Vs光柵
　　
多功能酶標儀的分類方法眾多，但最簡單的莫過于用他們的濾光方式來作分界線。一般來說，可以分為濾光片型和光柵型兩大類。當然也有一些型號，例如Synergy4和EnVision等，一臺機器里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測，還是想用光柵的時候用光柵，該用濾片的時候用濾片;還有一些實驗非用其中一個不可，另一模塊實現不了的。所以這類儀器本質上還只是把濾片和光柵放在了一起，并沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。
　　
總體來說，濾片技術由于發展已久，配合二向色鏡(其實也就是另一模式的濾光反光濾鏡)等光路系統，可以實現大部分實驗的需要。目前常規多功能酶標儀中最高的檢測靈敏度就是用濾光片型做出來的，例如TECAN Infinite F500的熒光檢測的靈敏度可以達到0.04 fmol/孔(熒光素，384孔/80ul)。
　　
但是濾光片型儀器由于受限于濾片的波長和數量限制，不可能滿足日益增加的實驗類型的檢測需要，而且有時需要對物質的吸收、激發和發射光譜進行研究，所以后來就誕生了光柵型的儀器。
　　
最先推出光柵的是MD公司，其光柵習慣上稱為單光柵。由于光純度的不足，在光柵的后面又加入了一組帶阻濾片，再把雜光過濾一遍，達到了5×10-4的雜光率，基本與純粹的濾光片系統一致。后來TECAN又發展出了雙光柵技術，通過兩次光柵濾光，雜光率降到了10-6。后來，Thermo、BioTek和PE的部分新款儀器等都使用了類似雙光柵技術。由于激發和發射各用了一組雙光柵，此類機器又被稱為四光柵型多功能酶標儀。
　　
光柵型酶標儀的推陳出新，使得用戶在波長選擇上不再受限，而且在雜光率、帶寬控制等性能上還超越了濾光片系統。例如，TECAN公司在2008年底推出使用了第三代四光柵系統的M1000酶標儀，雜光率降到了2×10-7的新低，還實現了帶寬2.5～20nm連續可調。這些都是目前濾光片型酶標儀所不能或者較難實現的。
　　
二、雜光率&波長準確性
　　
光柵型濾光系統儼然已經成為了目前通用性多功能酶標儀的主流，多家廠家共同努力，已經把光柵技術推到了歷史新高。在光柵的眾多技術參數之中，最關鍵的無疑就是光柵的雜光率和波長選擇的準確性了。
　　
雜光率指得就是光源通過光柵后，得到的光線中，“不需要”的波長的光占所標稱波長的光的比例，表征了濾光的純度。由于光線干涉、衍射等的復雜性，無論使用濾光片還是光柵，雜光都是不可避免的。各種濾光技術的本質就是要想辦法把雜光盡可能地去掉。

一般來說，濾光片型的雜光率在10-4～10-5之間，光柵型的可以做到10-6～10-7。由于此類雜光是非特異的，而且會直接進入最后的檢測器，所以有多少的雜光就會引入多少的隨機誤差。在熒光等檢測過程中，由于檢測器存在放大效應，雜光率的干擾也會被指數級放大。因此，雜光率就是一個濾光系統的首要性能指標。
　　
光柵的另一個重要指標就是波長選擇的準確性。因為很多檢測是依賴于物質在某個波長的特征圖譜。就像DNA/RNA的OD260濃度測定，實際檢測波長偏離260nm幾個nm以上的話，OD值與最終濃度之間的數學關系就會發生改變。因此，一組性能優良的光柵系統，他的波長選擇準確性應該是在±0.5～1nm之間。波長偏離過大有時就會影響到最終結果的準確性。
　　
這兩個可謂是光柵甚至濾光片濾光系統最關鍵的技術參數，直接影響到的是得到數據是否是真正所要測量的結果，是實驗結果可靠性的最基本要求。