多聚螯合物酶組化實驗——EnVision法

抗原-抗體反應結合后，第二抗體上標記有多聚化合物（葡聚糖）酶復合物（EnVision 復合物），與第一抗體結合，進而由酶作用底物進行顯色定位。EnVision 復合物是利用一種多聚化合物將 HRP 或 AKP 和第二抗體（抗鼠或抗兔 IgG）同時標記在一個多聚化合物上，即形成酶-多聚化合物-第二抗體巨大復合物。每 1 個分子的復合物中約含 70 個分子的 HRP 和 10 個分子的第二抗體，復合物中的 HRP 的絕對數量遠高于其他復合物（如 ABC），本身已具備高度放大作用，因此 EnVision 法敏感性顯著高于其他方法。復合物中存在多個第二抗體，也增加了該復合物與特異性抗體的結合機會。同時，人體內不存在該多聚化合物，無非特異性干擾，故背景染色淺。此外，染色步驟為兩步，且第二抗體孵育時較短，使該方法更省時而簡便。

石蠟切片

蛋白酶特異性一抗EnVision 復合物PBSH2O2樹膠二甲苯乙醇

滴管玻片

1. 4 μm 常規石蠟切片經烤片后，常規二甲苯、乙醇脫蠟至水，PBS 洗 3 min×3 次。

2. 預處理組織切片（可用酶消化或 AR 或不作任何處理，依一抗質量而定）。

3. PBS 洗 3 min×3 次。

4. 0.3％ H₂O₂ 阻斷內源性過氧化物酶 15 min，PBS 洗 3 min×3 次。

5. 適當稀釋特異性一抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 洗 3 min×3 次。

6. EnVision 復合物（即用型）孵育 30 min，PBS 洗 3 min×3 次。

7. 水洗，復染，常規樹膠封片。

8. 結果觀察。