多聚螯合物酶組化實驗——UIP法

石蠟切片

蛋白酶PBSH2O2樹膠二甲苯乙醇特異性一抗N-Histofine 復合物

滴管玻片

1. 4 μm 常規石蠟切片經烤片后，常規二甲苯、乙醇脫蠟至水，PBS 洗 3 min×3 次。

2. 預處理組織切片（可用酶消化或 AR 或不作任何處理，依一抗質量而定）。

3. PBS 洗 3 min×3 次。

4. 0.3％ H₂O₂ 阻斷內源性過氧化物酶 15 min，PBS 洗 3 min×3 次。

5. 適當稀釋特異性一抗，37℃ 孵育 1 h，PBS 洗 3 min×3 次。

6. N-Histofine 復合物（HRF 氨基酸-抗鼠或抗兔 IgG 復合物）孵育 30 min，PBS 洗 3 min×3 次。

7. 水洗，復染，常規樹膠封片。

8. 結果觀察。

UIP 法缺點是多聚物中有 N 末端暴露，形成的電荷能和組織細胞發生靜電吸附，可造成非特異性染色，染色時需平衡靜電荷。