近年來分子檢測在病原學診斷上的發展非常迅速,特別是對病毒和非典型病原體的檢出效率和準確性大幅提升,成為臨床和實驗室共同關注的熱點。此次新冠疫情后,無論臨床還是實驗室都意識到分子檢測在病原學診斷中具有不可或缺的地位。
感染性疾病是大家關注的公共衛生問題。在2016年世界衛生組織公布的數據,全球5690萬的死亡人口中,感染的因素占了很大一部分,特別是下呼吸道感染仍然是最致命的傳染病,在全世界造成300萬人口的死亡。面對感染性疾病的病原學檢測,臨床醫生希望我們能夠快速準確的出具報告,然而傳統的微生物的檢測方法達到此目標相對困難,但隨著分子技術的不斷應用,使這個目標得以實現。自新型冠狀病毒疫情爆發以后,國家衛健委發文要求有能力的二級以上的醫院要開展核酸檢測,建立分子生物實驗室,可以看出快速準確、全面的病原學檢測已經越來越成為我們臨床的剛需。通過多重的分子檢測,可以覆蓋多種病原、敏感度高、結果準確、報告快速、不受抗生素使用影響、操作簡便,其重要性日益凸顯。多重PCR技術概括的說就是在同一個PCR體系中同時加入多種靶標序列的特異性引物,對多個DNA或者RNA模板,或同一個模板當中多個區域同時進行PCR擴增。自1988年
Chamberlin等首次提出這一概念起,多重PCR技術已被廣泛應用于核酸診斷的許多領域,包括基因敲除分析、突變和多態性分析、定量分析以及RNA檢測等,
在感染性疾病領域使用也日益廣泛。它具有高效性、可靠性和簡便性。1、可以對同一份標本中的多種病原同時進行檢測,例如細菌,病毒,真菌等,可以檢出共感染;2、也可以同時檢測同個病原的多個位點,可以提高檢測性能,例如新冠檢測;可以用于區分病原體的多種血清型/基因型,比如說甲流的不同分型等。3、隨著細菌耐藥問題越來越嚴重,同時進行檢測病原和耐藥基因也越來越重要。CLSI100對耐藥基因的檢測部分進行了非常詳細的描述,也給予推薦。比如說MacA基因,推薦考慮用分子靶標的技術來進行檢測,比我們的一些表型實驗來的更加準確。這也促使我們各個廠家去開發耐藥基因的檢測。呼吸道的多重PCR檢測需要可以達到10重以上,涵蓋常見的病毒和非典型病原;多重PCR檢測可以對不同的病毒進行分型,例如甲流,副流感病毒等。可以有效縮短報告時間,并可以檢測不同病原的共感染,有研究表明新型冠狀病毒陽性患者21%存在共感染。有研究表明采用多重分子檢測(FilmArray)和常規檢測方法(包括常規、生化、PCR、培養等)進行對比,平均病原體報告時間縮短了33.8小時,實驗組的住院時間減少了1.5天,醫療花費減少。多重巢式PCR檢測試劑可以同時檢測33種病原和耐藥基因。在檢測金黃色葡萄球菌時,同時檢測其耐藥基因MecA/C基因以及MREJ片段。對MRSA(耐甲氧西林金黃色葡萄球菌)的陰性預測值(NPV)為100%;可以輔助降低萬古霉素等抗生素的過度使用。多重分子擴增技術可以加強實驗室對病毒、非典型病原以及耐藥基因等的檢測能力。
多重分子檢測更全面,可以有效檢出多種病原的共感染。結合微流控技術,可以有效提高多重分子檢測的效率,縮短病原體的報告時間,使用藥更精準。