[ 實驗目的 ]
通過本實驗掌握大腸桿菌感受態細胞的制備。
[ 實驗原理 ]
細菌處于易于吸收外源
DNA 的狀態叫感受態。細菌處于 0 ℃ 的 CaCl 2 低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形。轉化混合物中的 DNA 形成抗 DNA 酶的羥基 -
鈣磷酸復合物黏附于細胞表面，經 42 ℃ 段時間短時間熱激處理，促進細胞吸收 DNA 復合物。
[ 儀器、材料與試劑 ]
1. 超凈工作臺
2. 低溫離心機
3. 恒溫搖床
4. 高壓滅菌鍋
5. 恒溫水浴鍋
6 ．培養皿
（二）材料與試劑
1 ． 細菌： DH5
2 ． 100 mmol/L CaCl 2 （滅菌）
3 ． LB 培養基：配制每升培養基，應在 950 ml 去離子水中加入
胰蛋白胨 10 g
酵母提取物 5 g
NaCl 10 g
搖動容器直至溶解，用 5mol/L NaOH ( 約 0. 2ml ) 調節 pH 值至 7. 0 ，加入去離子水至總體積為 1L ，高壓滅菌 20min 。
4 ． LB 瓊脂培養基：先按上述配方配制液體培養基，高壓滅菌前加入瓊脂 16 ～ 18 g 。
[ 實驗步驟 ]
1. 挑取大腸桿菌單菌落接種于 20mL LB 培養基中， 37℃ 振蕩培養過夜。
2. 按 1% 接種量接種 20mL LB 培養基中， 37℃ 230 轉 /min 振蕩培養 3 h 。
3. 取 1ml 培養物，冰浴 30 min ， 4℃ 4,000 r/min 離心 3 min ，去上清。
4. 加 500ul 體積的冰冷的 0. 1 mol/L CaCl 2 溶液，重新懸浮細菌沉淀， 4℃ 4,000 r/min 離心 3 min ，去上清。
5. 加 100ul 體積的冰冷的 0. 1 mol/L CaCl 2 溶液，重新懸浮細菌沉淀， 4℃ 4,000 r/min 離心 3 min ，去上清。
6. 50ul 體積的冰冷的 0. 1 mol/L CaCl 2 溶液，重新懸浮細菌沉淀，冰浴 3 h-24 h ，即為大腸桿菌感受態細胞。