實驗方法原理 測定微生物生長曲線的方法很多,有血球計數法、平板菌落計數法、稱重法、比濁法等。本實驗采用比濁法測定,由于細菌懸液的濃度與混濁度成正比,因此,可利用光電比色計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,并將所測得的光密度值(OD值)與其對應的培養時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。現已有直接用試管就可以測定OD值的光電比色計,只要接種一支試管,定期用它測定,便可做出該菌的生長曲線。
實驗材料 大腸桿菌
試劑、試劑盒 肉膏蛋白胨
儀器、耗材 試管分光光度計自控水浴振蕩器搖床無菌吸管
實驗步驟
1. 編號
取11支盛有肉膏蛋白胨液體培養基的大試管,用記號筆標明培養時間,即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時。
2. 接種
用1 ml 無菌吸管,每次準確地吸取0.2 ml 大腸桿菌培養液,分別接種到已編號的11支肉膏蛋白胨液體培養基大試管中,接種后振蕩,使菌體混勻。
3. 培養
將接種后的11支試管置于自控水浴振蕩器或搖床上,37℃振蕩培養。分別在0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時將編號為對應時間的試管取出,立即放冰箱中貯存,最后一同比濁測定光密度值。
4. 比濁測定
以未接種的肉膏蛋白胨培養基作空白對照,選用540~560 nm 波長進行光電比濁測定。從最稀濃度的菌懸液開始依次進行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的肉膏蛋白胨液體培養基適當稀釋后測定,使其光密度值在0.1~0.65以內,記錄OD值時,注意乘上所稀釋的倍數。
5. 結果
將測定的OD值填入下表。