名稱:大鼠灌注取腦 標準操作規程(SOP)
關鍵詞:大鼠 灌注取腦
目的: 完整取出大鼠腦部(取材)
操作步驟
流程:1)麻醉 2)開胸 3)心臟左心室穿針,剪開右心耳 4)生理鹽水沖水 5)4%多基甲醛固定 6)取腦 7)保存或切片.
1 多聚甲醛的配置:
一般方法為:4%多聚甲醛PBS緩沖液配法:稱取40g PFA溶于裝有500ml DEPC水的玻璃容器(燒杯或燒瓶)中,持續加熱磁力攪拌至60~65℃,使成乳白色懸液。用1.0mol/L的NaOH值至7.0,使呈清亮狀(滴加),再加入約500ml PBS,充分混勻(在冰浴或冷水浴中),可再檢測一下pH,過濾后定容至1000ml,室溫或4℃保存備用。
我們用的方法:加熱至60~65℃固然融解的快,不過容易揮發,氣味難聞,不是好的選者。我們是這樣做的,感覺不錯,在此強烈推薦:先配好pbs,稱好相應的多聚甲醛,37c水浴或溫箱密封放置2天,就能全溶。
3 麻醉后開胸:暴露充分些容易心臟穿刺及剪開右心耳。箭頭所指為右心耳。
4心尖插入灌注針頭,剪開右心耳,開放靜脈血。
5 夾閉腹主動脈:只灌注上肢及頭腦,固定的好又快,又省多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。
6 先灌注生理鹽水約100ml,見到老鼠兩前肢及兩肺變白可改灌注多聚甲醛。
7 灌注成功的標志:剛開始灌注時老鼠前肢劇烈抽動(下肢不抽動證明腹主動脈夾閉完全);前肢及頸部僵硬;所灌注的腦組織白而硬。
8 分離除去后頸部肌肉 。
9 用彎鉗仔細剔除顱骨 。