大鼠神經元細胞的分離和培養實驗

母鼠

BSS

無菌器械 顯微鏡

1. 殺死懷孕 18 天母鼠（常用過量 CO₂ 使其窒息），用無菌器械取出胚胎，放在無菌的培養皿中。

2. 取下胚胎的頭，放在盛有 4 ml 不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的平衡鹽溶液（BSS）的培養皿中。

3. 從頭顱骨上取下腦，放在 35 mm 培養皿中的 BSS 液滴上，培養皿中半裝滿 Paraplast（Sigma）。

4. 在顯微鏡下剝離腦膜，取下海馬體，放在裝有 BSS 的 35 mm 培養皿中。

5. 海馬體在新鮮配制的 0.25% 胰酶 BSS 溶液中 37℃ 孵育 15 分鐘。

6. 小心吸掉胰酶溶液，加入 5 ml BSS，層流柜中室溫放置 5 分鐘。重復此步兩次或更多次，最后加入 2 ml BSS。

7. 首先用普通巴斯德吸管分離細胞，然后換用一支用火燒平尖端、內徑縮小一半的吸管。

8. 計數細胞，確定細胞密度。

9. 所需數目的細胞懸浮于接種培養基中，接種培養皿中 poly-L-lysine 預處理的蓋玻片。如果用于生化實驗，細胞直接接種 poly-L-lysine 處理的培養皿。


10. 2~4 小時后，蓋玻片轉移至含有單層神經膠質的培養皿中，培養皿中是維持培養基。

11. 每周更換 3 ml 培養液。