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  • 發布時間:2020-06-29 16:58 原文鏈接: 大鼠脫氧吡啶酚elisa試劑盒使用說明

    大鼠elisa試劑盒使用目的:

    本試劑盒用于測定大鼠血清、尿液及相關液體樣本中脫氧吡啶啉(DPD)含量。

    大鼠elisa試劑盒實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠脫氧吡啶啉(DPD)水平。用純化的大鼠脫氧吡啶啉(DPD)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脫氧吡啶啉(DPD),再與HRP標記的脫氧吡啶啉(DPD)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脫氧吡啶啉(DPD)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠脫氧吡啶啉(DPD)濃度。

    標本要求

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步驟

    標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 

    配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    溫育:操作同3。

    洗滌:操作同5。

    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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