如何使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶

報告基因檢測被廣泛應用于研究基因表達及外部刺激下原核和真核細胞的反應。Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。但是報告基因實驗中往往會受到各種實驗條件的影響，例如培養細胞的數目和活力的差別、細胞轉染和裂解的效率、以及加樣操作過程中引起的變異。Dual-Luciferase雙熒光素酶報告基因檢測系統中含有在同一細胞中同時表達的兩種熒光素酶。共轉染的“對照”報告基因會作為內對照，減小細胞活性和轉染效率對實驗的影響。因此雙報告系統減少了外部干擾，使得實驗數據更可信。Promega提供了一種先進的雙報告基因技術（Dual-reporter assays）,結合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試，該技術同時使用兩個獨立的報告基因以提高實驗的準確性，Biotek synergy 系列微孔板檢測儀作為雙報告基因的檢測分析平臺獲得了Promega DLR 認證。
在雙報告基因系統中，通常一個報告基因用于檢測特定實驗條件下待測物的反應，即“實驗”reporter，另一個報告基因用來檢測實驗條件，類似于內部對照，用于校準“實驗”reporter的數據。通過這種方法，可減少內在的變化因素所削弱的實驗準確性，例如：轉染效率、細胞活性、細胞裂解差異以及加樣操作過程中引起的差異。Promega公司的Dual-Luciferase系統利用螢火蟲和海腎熒光素酶的活性分別檢測實驗組和對照組。螢火蟲熒光素酶是一種分子量為61KD的單體酶，分兩步催化蟲熒光素的氧化反應，產生560nm的光，海腎熒光素酶是一種分子量為36KD的單體酶，催化海腎熒光素的氧化反應，產生中心波長為480nm的藍光。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶沒有種源同源性，對應不同的反應底物，反應中沒有任何的交叉干擾。