• <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 發布時間:2023-09-14 10:54 原文鏈接: 如何分離核酸蛋白和有機物

    CTAB法的全稱是十六烷基三甲基溴化銨法。具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物,但不會沉淀核酸。再通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質后,加入乙醇沉淀,即可使核酸分離出來。
    (1) 2%CTAB抽提緩沖液在65℃水浴中預熱。
    (2)取少量實驗材料(約300mg)置于研缽中,用液氮磨至粉狀;
    (3) 加入700ul的2%CTAB抽提緩沖液,輕輕攪動;
    (4) 將磨碎液分倒入1.5 ml的滅菌離心管中,磨碎液的高度約占管的三分之二;
    (5)置于65℃的水浴槽或恒溫箱中,每隔10 min輕輕搖動,30~60min后取出;
    (6)冷卻2 min后,加入氯仿-異戊醇(24:1)至滿管,劇烈振蕩2~3 min(若提取的是總基因組,則不能劇烈震蕩。),使兩者混合均勻;
    (7)放入離心機中10 000 rpm離心10 min,與此同時,將600 ul的異丙醇加入另一新的滅菌離心管中;
    (8) 10 000 rpm離心1 min后,移液器輕輕地吸取上清夜,轉入含有異丙醇的離心管內,將離心管慢慢上下搖動30 sec,使異丙醇與水層充分混合至能見到DNA絮狀物;
    (9)10000 rpm離心1 min后,立即倒掉液體,注意勿將白色DNA沉淀倒出,將離心管倒立于鋪開的紙巾上;
    (10)60 sec后,直立離心管,加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸鈉,輕輕轉動,用手指彈管尖,使沉淀與管底的DNA塊狀物浮游于液體中;
    (11)放置30 min,使DNA塊狀物的不純物溶解;
    (12)10000 rpm離心1 min后,倒掉液體,再加入800 ul 75%的乙醇,將DNA再洗 30 min;
    (13)10000 rpm離心30 sec后,立即倒掉液體,將離心管倒立于鋪開的紙巾上;數分鐘后,直立離心管,干燥DNA(自然風干或用風筒吹干);
    (14)加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)緩沖液,使DNA溶解,置于37℃恒溫箱約15 h,使RNA消解;
    以上為通用CTAB法,實驗時可根據不同材料加以改進,以獲得最佳實驗結果.

  • <table id="4yyaw"><kbd id="4yyaw"></kbd></table>
  • <td id="4yyaw"></td>
  • 调性视频