酶標儀在細胞生物學與藥物篩選方面有著非常高的使用頻率，而在各種細胞檢測實驗中，細胞增殖能力的檢測是最為常見也是最基礎的檢測之一。
●為什么要檢測細胞狀態呢？
細胞狀態是直接反應細胞生理狀態的重要指標，通過監測細胞在各種化合物刺激作用下的反應狀態，從而確定測試分子是否對細胞增殖有影響或具有直接的細胞毒性效應。
● 有哪些方法能檢測細胞增殖能力？
檢測細胞增殖的方法很多，目前可用直接法和間接法來測定。其中直接法，是通過直接測定進行分裂的細胞數來評價細胞的增殖能力。例如：Ki67細胞增殖檢測；BrdU細胞增殖檢測；EdU細胞增殖檢測。而間接法，即細胞活力檢測方法，則是通過檢測樣品中健康細胞數目來評價細胞的增殖能力。例如：MTT法、CCK8法等。細胞活力檢測法并不能最終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養條件下會自發啟動凋亡程序，但藥物的干擾可抑制凋亡的發生；這時若采用細胞活力檢測法，顯然可以區分兩種條件下的細胞數量，但我們并不能從藥物干擾組細胞數大于對照組的事實說明藥物可促進細胞增殖的結論。所以最直接的證據還是直接法的測試結果。
常見可用于酶標儀上的細胞活力檢測實驗有哪些？
01、BrdU細胞增殖檢測
用 BrdU 預處理的細胞中， BrdU 可代替胸腺嘧啶核苷插入復制的 DNA 雙鏈中，而且這種置換可以穩定存在，并帶到子代細胞中。細胞經過固定和變性處理后，可用免疫學方法檢測DNA 中 BrdU 的含量（如采用鼠抗 BrdU 單克隆抗體特異識別 BrdU, 再采用辣根過氧化酶標記的山羊抗鼠IgG 二抗標記，最后用比色法或熒光的方法進行定量測定），從而判斷細胞的增殖能力。若采用ELISA法進行檢測，往往在450nm處進行檢測。
02、經典實驗—MTT法
MTT（四氮唑藍）是一種適合于高通量篩選96孔的細胞活力測定法。它是利用活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶對MTT進行還原，形成不溶于水的紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，最后使用特定的有機溶劑，如二甲基亞砜（DMSO）等溶解后，在570nm處檢測。MTT法實際上是檢測細胞線粒體的代謝活力。
優點：
步驟少
耗材少
無放射性
缺點：
不適合于懸浮細胞
細胞毒性大
培養板中沉淀的細胞碎片易造成讀數干擾
03、CCK-8法
CCK-8是由MTT衍生出來的一種方法，它可以被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。通過酶標儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。
優點：
操作簡單快速
無輻射
可檢測活力和毒性
適合懸浮細胞
甲瓚可溶于水
缺點：
比MTT貴
試劑顏色與細胞培養基顏色相近
易漏加
04、SRB比色法
SRB（Sulforhodamine B）是一種粉紅色陰離子染料，易溶于水，在酸性條件下可特異性地與細胞內組成蛋白質的堿性氨基酸結合；在540 nm波長下產生吸收峰，吸光值與細胞量成線性正相關，故可用作細胞數的定量檢測。
優點：
細胞固定
不易受化合物干擾
不易變色穩定性好
缺點：
操作步驟復雜
間接法比較
● 提示
細胞活性與增殖實驗作為最常見的細胞實驗之一，市面上已有很多成熟而穩定的試劑廠家，但不同廠家的試劑配方略有差異，因而在檢測方式上也會有略微區別，客戶需根據不同廠家的操作步驟進行試驗的優化。
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