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  • 發布時間:2022-04-25 14:25 原文鏈接: 如何提高目的蛋白的可溶性表達

    在大腸桿菌中,當外源蛋白高水平表達的時候,極易形成包涵體,為蛋白純化等下游工作帶來很大的麻煩。下面是一些可以參考的有助于提高目的蛋白可溶性表達的實驗方案:1.降低蛋白合成的速度。可以通過以下方法實現: a.降低培養溫度 b.使用弱啟動子 c.使用低拷貝數的質粒表達載體 d.降低誘導物的濃度2.改變培養基。 a.培養基中加入可以幫助蛋白折疊的因子 b.加入緩沖液保持pH穩定 c.加入1%的葡萄糖,抑制lac啟動子 d.加入山梨糖醇等可以穩定蛋白天然結構的因子 e.加入乙醇, thiols and disulfides等3.與分子伴侶或折疊酶共表達。常用的分子伴侶有: GroES-GroEL DnaK-DnaJ-GrpE ClpB常用的折疊酶有: peptidyl prolyl cis/trans isomerases (PPI's) disulfide oxidoreductase (DsbA) and disulfide isomerase (DsbC) protein disulfide isomerase (PDI)4.分泌表達。使目的蛋白分泌到周質空間。周質空間的氧化性的環境有利于二硫鍵的形成,而胞內則是還原性的。周質空間有折疊酶DsbA和DsbC的存在,幫助蛋白正確折疊。周質空間很少有蛋白酶存在,不會被水解。可以使對細胞有毒性的蛋白大量存在。5.使用特定的菌株。 AD494, which has a mutation in thioredoxin reductase (trxB). Origami,a double mutant in thioredoxin reductase (trxB) and glutathione reductase (gor).6.與可溶性partner融合表達。7.表達目的蛋白的一個片段。> 70 kDa的蛋白在大腸桿菌中是很難表達的。8.體外去折疊,重新折疊。

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