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  • 發布時間:2021-08-14 21:18 原文鏈接: 如何提高PCR的擴增效率

    P不出來,如果引物沒有問題那就是反應條件沒有設置好了

    首先看看你所用的酶的效率(普通Taq酶的效率為0.8~1.2kb/s),延伸時間是不是太短了,再看看酶活性是不是還好,做個陽性對照

    其次看看退火溫度,是不是過高或者過低

    再次看看你的模板,如果是基因組DNA,跑跑膠看看有沒有降解,量加的夠不夠(基因組屬于復雜模板,起始量應稍大一點),如果是RT產物,量又不能加太多,RT體系里的成分會抑制PCR反應

    最后看看你的時間,一般初始變性2~5min,變性20s~30s,退火20s~30s,延伸視長度而定,終延伸7~10min

    以上差不多是做PCR基本的東西,僅供參考

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