1． 37℃水浴預熱培養液（HUVEC-004）。
2． 從液氮中取出HUVEC的細胞管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直到管中只剩下最后一片結晶（注意：不要讓水沒過產品管）。 用75%的酒精擦拭產品管外壁。
3． 將HUVEC的細胞管中的細胞移至15ml無菌離心管中，慢慢逐滴加入預溫的37℃ 基礎培養液（HUVEC-004B）培養液4－5ml混勻，邊加邊搖勻。
4． 用1ml的培養液沖洗HUVEC的細胞管，向15ml離心管中加入沖洗的細胞懸液，邊滴加邊搖勻。
5． 取10μl細胞懸液和10μl臺盼藍混勻后，取10μl計數。
這一步驟非常重要，能確定您收到的產品是否合格（詳見如何計數復蘇的細胞）
6． HUVEC的細胞懸液在1500rpm，室溫條件下，離心10分鐘，去除上清。
7． 加HUVEC完全培養液4－5ml, 輕輕混勻細胞，備用。
8． 接種前將 T25培養瓶中的包被液吸去，按2500－5000個細胞/cm2接種細胞。（1支冷凍的細胞可以種一瓶T25培養瓶）
9. 每個HUVEC的細胞培養瓶中加完全培養液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培養箱內培養。