如何測定多糖

季宇彬.《中藥多糖的化學與藥理》. 北京:人民衛生出版社.2005.5多糖含量測定（1）顯色試劑硫酸法：根據單糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脫水生成糖醛類化合物，與酚類、芳胺類等縮合成有色化合物。苯酚硫酸法生成橙黃色溶液，在490nm處有特征吸收；蒽酮硫酸法生成亮綠色溶液，在630nm處有特征吸收；咔哇硫酸法用于測定糠醛酸（伯醇基氧化：形成糠醛酸，斐林（Fehling）試劑可定量。苯酚-硫酸試劑可與游離的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起顯色反應，己糖在490nm處（戊糖及糠醛酸在480nm處）有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關系）。顯色試劑硫酸法方便簡單，但需嚴格控制水解條件。（2）DNS法：一個能消除還原性雜質干擾的方法（在氫氧化鈉和丙三醇的存在下，還原糖能使DNS還原生成3-氨基-5-硝基水楊酸，在沸水浴中顯色2~5min，此化合物在過量的氫氧化鈉堿性溶液中呈橘紅色，波長在540nm下有最大吸收峰，并且吸光度與還原糖含量有線性關系。試驗過程中諸多因素如吸收光譜、顯色劑用量、顯色時間等均對測定結果有直接影響）。利用3,5-二硝基水楊酸與多糖水解產物還原糖共熱后還原成棕紅色氨基化合物，于540nm處有特征吸收。（主要參考文獻：董文慧,等.云芝肝泰中云芝多糖的工業分析方法.中成藥,1990,12(2):33.齊香君,等.3,5-二硝基水楊酸比色法測定溶液中還原糖的研究. 纖維素科學與技術.2004,12(3):17~19）（3）滴定法：有斐林氏滴定法，間接碘量滴定法。（4）氣相色譜法：可定性、定量分析多糖的組分及含量，常采用衍生物法以增加其揮發性。一般是將多糖酸水解物或甲醇解（用鹽酸-甲醇）物，用三甲基硅烷基化（TMS）或三氟乙酰化（TFA）轉化為硅烷化產物或二酰化產物進行氣相色譜分析。但乙酰化之前，糖先用KBO4或NaBH4作還原成開鏈的糖醇化合物較好。多糖用甲醇解方式把半縮醛甲基化，形成甲基糖苷后再TMS化，異構物減少，有利于分辨。常以甘露醇或肌醇為內標，用已知的各種單糖作標準。（5）高效液相色譜法：選用TSK、SW凝膠排斥色譜柱為分離柱，樣品經簡單預處理，在示差折光檢測器中進行檢測，以不同分子量的標準右旋糖酐作標準，同時測定樣品中多糖的分子量分布情況及其含量。換算因子F的測定參見附件還陽參多糖的定性分析及含量測定.pdf|||常見的方法有：GPC測定多糖分子量及其分布瓊脂糖電泳法HPLC方法測定多糖。不同的方法會有些差異。