如何用制備色譜柱制備低含量的雜質？

制備色譜柱為Zorbax SB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent 1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質，初步提純后用高分辨的LC-MS進行定性分析。如何設定色譜條件，如流量，進樣量，樣品的濃度，切割點的設置，是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。（主峰后有二個雜質靠得很近。）

1 制備用的流動相最好等級高一點，否則流動相中的雜質會影響LC-MS分析。

2 使用餾分收集器時，延遲體積一定要計算精確，檢測器的響應時間設到最小，否則都會影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2, 大約為4ml/min。進樣量設到幾個mg應該基本沒有過載。進樣樣品濃度越高越好。假如進樣10mg，理論計算0.05%的雜質大約只有5ug，顯然濃度太低，最好是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。