尿路感染的診斷不能單純依靠臨床癥狀和體征，主要依靠實驗室檢查。其診斷標準：
1.正規清潔中段尿（要求尿停留在膀胱中4～6小時以上）細菌定量培養，菌落數≥105/ml。
2.參考清潔離心中段尿沉渣白細胞數>10個/HFP，或有尿路感染癥狀者。
具備1，2可以確診。如無2則應再作尿細菌培養復查，如仍≥105/ml，且兩次細菌相同者，可以確診。
3.作膀胱穿刺尿培養，如細菌陽性（不論菌數多少），亦可確診。
4.沒有條件作尿細菌培養計數者，可用治療前清晨清潔中段尿（尿停留于膀胱4～6小時以上）正規方法的離心尿沉渣革蘭染色找細菌，如細菌>1個/油鏡視野，結合臨床癥狀，亦可確診。
5.尿細菌數在104～105個/ml者，應復查，如仍在104～105個/ml，需結合臨床表現或做膀胱穿刺尿培養來確診。