如何選擇臨床檢驗試劑？

摘要:許多臨床檢驗項目需要通過試劑來完成的。在實際工作中，由于所用的儀器種類繁多，試劑盒品牌不一，實驗室工作人員業務能力的差異等，造成不同實驗室間的測定結果差異較大。不同廠家品牌的試劑，因其生產原料、生產流程、制造工藝、質量控制等差別，試劑的質量也相差甚遠。對某一個檢驗項目而言，并不是所有的試劑都得出同樣的結果。檢驗結果的質量如何保證？因此我們要通過一系列的驗證試驗來決定如何選擇最合適的檢驗試劑，以達到實驗室標準化管理的要求。

一、試劑

定義：引發或催化化學反應從而使分析物被檢測或測定所必需的物質。

分類：一般試劑（generic  reagent）、原廠（Original Equipment Manufacturer）試劑、替代(Replacement)試劑。

一般試劑：用于手工操作或任何開放系統，是實驗室進行性能驗證時可選擇的試劑。

原廠試劑：用于特定的分析儀（封閉或半封閉系統）。由OEM 生產或由其他供應商提供。

替代試劑：由設備制造商以外的其他供應商提供的用于特定分析儀的一般試劑。

如何選擇試劑

試劑的選擇必須在分析許多因素的基礎上而做出。首先，列出這一項目的所有可能得到的試劑；獲取試劑相關信息；試劑的包裝和成分；在選擇前做驗證試驗。

（一）選擇試劑時需考慮的因素

1．實驗方法的復雜性

在選購試劑盒時要仔細閱讀試劑盒說明書，對試劑盒所用方法的原理、試劑配方（包括緩沖液、底物、添加劑等）有所了解，選擇衛生部臨床檢驗中心推薦的常規方法的試劑盒。有些項目沒有推薦常規方法，應該選擇公認的測定方法試劑盒。對于手工操作的試劑盒，有些試劑盒試驗步驟少，不需要較高的技術要求（如精確吸樣）而更容易操作；有些方法有需要準確計時，容易因為操作人員技術掌握程度等原因而導致工作中斷而影響準確計時，進而出現錯誤；有些方法需要更多的操作時間和工作人員的關注。選擇試劑盒時應考慮上述因素。

2．廠商的支持

1）必須有嚴格的溯源性。不同廠家提供的試劑說明書的嚴謹性有很大的區別。如在某些試劑盒內，有圖解操作說明書，以圖形的形式描述每一操作步驟，可以快速指導操作人員操作。說明書應清楚、圖解清晰、不含糊；應詳述常見的操作問題和注意事項，以及故障排除方法，并提供免費技術支持電話。說明書還應包含反應原理和視覺上讀數或判斷的終點。顏色終點通常比凝集終點更易判斷，且受人為因素影響小。

2）此外，試劑盒內的設計合理，使試劑按使用順序有規律擺放、方便使用的包裝、明確的標識，這些都更方便用戶使用。

3）要有明確簡明的操作規程，在試驗臺上放置簡短的操作卡可以避免錯誤、使試驗順利。

4）供應商要有足夠的庫存周轉以避免試劑的效期太短。最好在當地有試劑庫，可以減少醫院試劑的庫存。

5）每個項目檢測均需要作質控，但并不是所有廠商都將質控物包裝在試劑包內，有些時候根本不提供質控。對于定量試驗我們盡量選擇帶有高、低值質控物的試劑；對于定性試驗最好選擇帶有臨界值質控物以及陽性和陰性質控物的試劑，臨界值質控物應與臨床標本有相似的反應性，強陽性反應的質控物不能預示試驗性能降低，而臨界值質控物能監測試劑檢測的靈敏度。

3．可靠性

評價試驗方法或試劑的最根本因素是試驗能準確提供臨床有用信息——試驗的敏感性和特異性。這一信息應由生產廠商提供。我們也應根據國際參考方法對試劑的敏感性和特異性作出對比和評價。

1）室間質量評價也被稱作能力驗證（proficiency   testing，PT）的成績是評價特定試驗系統可靠性的一種途徑。每一次PT結果將PT參加者按試驗系統分類分析。從這一分析結果可評價參加者變異性（精密度）和每一系統的均值與靶值的接近程度（準確度，偏倚）。但是用PT成績準確評價偏倚也有一定缺陷，因為一些人工的PT試驗標本往往由于基質效應而不能與病人標本一樣發生反應，造成偏倚假象，當分析病人標本時并不出現這種假象。只有當參加者PT結果準確性出現大差異時，在評估參加者檢測系統時是有意義的。

2）試劑容易因試劑包裝、運輸時保存溫度的改變、受潮和光照等原因而變質或效能減低。大包裝的試劑比小包裝試劑更易受環境影響。因而供應商應能根據實驗室的規模大小提供不同規格包裝的試劑，并能保證物流公司或廠家自身配送隊伍能按試劑要求的溫度運送，全程保持溫度一致。

4．經濟和成本

每項檢測的實際成本取決于許多方面，通常與供應商提供的項目單價有很大差異。

1）首先應該根據自己實驗室的工作量仔細考慮試劑包裝，比較實驗室的工作量和試劑包裝是否會導致試劑的過期或浪費，試劑必須在有效期內使用完畢。如果需試驗量大，就應該選擇大包裝試劑。如果樣本量不大，幾周甚至一個月才檢測一次的項目，與其自己測定還不如送到其他實驗室檢測。不僅要考慮試劑盒的有效期，而且要考慮一旦試劑開封后其在機上有效期、復溶穩定期，甚至試劑盒中的試驗條、玻片、電極、托架或托盤等都有可能變質。

2）儲存空間也代表成本，尤其試劑盒很大、包裝不經濟、浪費很多空間或試劑需要冷藏或冷凍保存。實驗室將配備更多更大容積的冰箱，因而對試劑的包裝也要有所要求。

3）嚴格遵照廠商的質控、校準建議和技術說明書執行。從經濟角度講，做較少的質控和校準更節省試劑和勞動成本。所有實驗每天都需要做質控。一般而言需要做陽性和陰性質控或兩水平質控。某些試劑盒中提供質控，有些廠商不提供質控物。要確定這些自備的質控物和校準物是否構成額外的成本支出。一些在玻片或卡片上進行的免疫反應都包含陽性和陰性質控，不需要額外的質控。

4）如果由于某個額外的試驗必須參加額外的PT計劃，那么PT成本可能很大。

5）試驗中最主要的成本是員工的時間：包括試劑的準備、校準、質控和系統維護。

（二）、試劑盒的性能評價

在考慮上述方法學、廠商支持、可靠性、經濟成本等因素的基礎上，對初步選定的試劑需進行性能評價，以確定該試劑是否符合要求。

1．試劑盒性能評價的重要性：同一種試劑有許多生產廠家，不同廠家產品的質量、技術含量等常有區別，有時即使同一廠家不同批號的同種試劑因原料來源、純度不同以及生產條件變動，會產生批間變異。同一批號的同種試劑盒在儲存、運輸時的情況有所不同，性能也可能發生變化。因此對購入的試劑盒應進行性能檢測，只有質量達到標準方可用于實際工作。

2．試劑盒性能檢測的具體方法：總的原則應不低于《衛生部臨床檢驗體外診斷試劑盒質量檢定暫行標準》的規定。同項目試劑盒之間作比較，如果穩定性好、靈敏度高、線性范圍寬、正向型試劑空白吸光度低、反向型試劑空白吸光度高、試劑空白速率低、瓶間差小者可視為優質試劑。具體評價方案見下表。

評價方案

（三）、試劑選擇原則

選擇證件齊全的生產廠家，國外試劑應具有進口許可證、海關報關單等，國內試劑生產廠家應提供生產許可證，國家食品藥品監督管理局或省、市、自治區食品藥品監督管理局頒發的注冊證、生產制造批文號以及檢測報告等。

選擇經室間質評和室內質控證實準確度高、重復性好、靈敏度高、線性范圍寬、抗干擾能力強、穩定性高的試劑品牌。

在各項性能、質量指標相近的情況下，選擇操作簡便、易于保存、價格相對低廉的試劑盒，力求最佳的性能/價格比。

選擇與本實驗室儀器最匹配的試劑盒，獲得一個較好的檢驗結果。許多儀器對試劑有特殊的要求，有些儀器依賴配套的專用試劑。

選購用于自配試劑的化學藥品時，根據檢驗方法的要求及樣品的含量而定，用于檢測樣本含量低、干擾因素多的物質所用的化學試劑，必須選用品級純度較高的試劑，至少分析純以上；而用于定性檢測試劑要求相對較低，可選用實驗試劑或化學純。

試劑的選擇是綜合多種因素后所作出的決定。試劑性能評價的結果是選擇質量高、性能好試劑的基礎，也是試劑選擇的前提。其次要考慮試驗成本，試劑的總成本高于單項試劑成本，其中不僅包括消耗成本，還包括人員、設備成本以及當實驗室需要做額外的性能評價時的成本。選擇試劑時還必須考慮實驗室人員的技術培訓和經驗水平。只有這樣才能既保證了試劑質量又兼顧了成本效益，達到質量效益雙贏。

附錄：NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standards)：臨床實驗室標準國家委員會

EP5-A：臨床化學設備操作精密度評價   核準指南（ Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry  Devices; Approved Guideline ）用于 臨床化學設備操作精密度評價的實驗設計及如何與生產廠聲明的精密度進行比較。

EP6-A：定量分析方法的線性評價：統計方法   核準指南  第二版（ Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical  Methods: A Statistical Approach; Proposed Guideline Second Edition  ）：指南可用于在法評價過程中檢驗方法線性、作為常規質量保證的一部分進行線性檢查及驗證廠家聲明的線性范圍。

EP07-A：臨床化學實驗干擾  批準指南（ Interference Testing in Clinical Chemistry; Proposed Guideline ）提供背景信息和鑒定程序，用于干擾物對檢驗結果影響的定性。

EP09-A2：用病人標本進行方法學比較和偏倚評估   核準指南（ Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;  Approved Guideline ）主要用于檢驗兩種臨床方法或設備間的偏倚，和使用病人樣本進行方法比較的實驗設計及數據分析。

EP10-A：定量實驗的初步評價方法   核準指南（Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory  Methods: Approved Guideline）主要用于初步評價臨床檢測試劑的線性漂移、偏差、精密度、交叉污染等。