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  • 發布時間:2022-09-26 11:09 原文鏈接: 如何選擇瓊脂糖凝膠的濃度

    目的產物大小80BP的片段,你可以用2.0%的瓊脂糖凝膠進行電泳,瓊脂糖以及TAE的量的多少,首先與你跑得樣品的個數有關,因為你樣品的個數決定了你膠槽的體積,膠槽的體積決定了你的TAE的量,決定了瓊脂糖的量,比如說你膠槽的體積是20ml, 那么你要配2.0%的膠,就需要20ml的TAE和0.4g的瓊脂糖。
    做膠的時候要注意一定要讓瓊脂糖充分溶解,可以煮沸,同時也要注意煮沸的過程中TAE的蒸發,我第一次做膠的時候,用燒瓶煮沸差點都蒸發光了;再就是加EB的時候以不燙手為標準,因為高于70度時EB會升華蒸發,過于冷卻了會使EB的濃度不均;因為EB為致癌物質,所以操作時一定要注意做好自我保護;再就是膠槽要洗干凈,梳齒一定要放正,免得跑出來的帶不整齊。
    跑膠的時間和電壓成反比,電壓和電泳槽兩個電極之間的距離成正比,一般是小于5V/cm. 因為你的片段很小,所以很有可能和引物二聚體無法區分,所以你再跑電泳時時間應該適當延長一些,可以使溴芬蘭指示條帶跑過膠的2/3處,因為時間長了,因物二聚體就會跑沒了,而目的產物不會。

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