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  • 發布時間:2020-04-13 22:28 原文鏈接: 如何選擇符合您需求的HPLC或UHPLC色譜柱?(三)

    3.ACE Excel為UHPLC帶來了享有盛譽的ACE HPLC性能

    重要的是要認識到色譜柱的選擇性和柱效是獨立的變量,在開發分離方法時您不必選擇使用一種而不使用另一種。事實上,為了實現最佳的總體分離效果,您應當對上述兩個變量以及保留值進行優化。當需要實現高速分離時尤其如此。(參見圖7)

    圖 7:利用柱效和鍵合相選擇性來開發更快的分離方法


    條件:
    流動相:

    A = 5mM甲酸(0.189)ml / L;

    A = 5mM甲酸(溶于甲醇中)

    柱溫:40℃

    檢測:PDA, 254nm

    樣品:

    1. 阿司匹林

    2. 非那西丁

    3. 1,3-二硝基苯

    4. 苯甲酸乙酯

    5. 尼美舒利

    6. 布洛芬

    7. 吲哚美辛

    利用UHPLC色譜柱更高的柱效,可在更高的流動相流速下使用更短的色譜柱,以使這種混合物的分離時間縮短80%(相比HPLC色譜柱)。

    然而,也可以通過優化鍵合相的選擇性來進一步縮短分離時間,在這個案例中,就是利用了C18-PFP鍵合相所具有的增強的選擇性。

    與C18UHPLC色譜柱、C18 HPLC色譜柱相比,ACE Excel C18-PFP UHPLC色譜柱分別將混合物的分離時間縮短了80%以上以及96%,同時保持了所有峰的極佳分離度。

    ACE Excel UHPLC色譜柱的設計旨在充分利用低擴散、超高壓UPLC?和UHPLC儀器(高達1000 bar),并可與所有市售UPLC和UHPLC系統相兼容。

    ACE Excel UHPLC色譜柱可以為堿性化合物提供更佳的峰形,改善柱子與柱子之間的重現性,提供額外的利用多種分離機制的固定相,以及改善色譜柱的耐用性。

    ACE Excel UHPLC色譜柱的可用性意味著色譜分析師在使用UPLC和UHPLC儀器時有更多的選擇來獲得更好的結果。

    圖 8:ACE Excel色譜柱提供快速、高分辨率的分離

    條件

    色譜柱:ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm

    流動相:60秒內從30%B至100%B

    A =水+ 0.1%TFA B =乙腈

    流速:2.5 mL/min

    柱溫:40oC

    壓力:703 bar (10,335 psi)

    檢測:PDA, 254 nm

    儀器:安捷倫1290 UHPLC

    化合物

    1. 乙酰苯胺

    2. 苯乙酮

    3. 苯丙酮

    4. 苯丁酮

    5. 二苯甲酮

    6. 苯戊酮

    7. 苯己酮

    8. 苯庚酮

    9. 苯辛酮


    ACE Excel C18色譜柱可在不到60秒內提供這9種分析物的基線分離。

    4.已經證實ACE HPLC色譜柱和ACE Excel UHPLC色譜柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和卓越的色譜柱壽命。

    通過鍵合在硅膠固定相載體上的硅氧烷的酸化水解可以失去鍵合相,從而降低色譜柱的壽命。該酸水解隨著流動相pH的降低和柱溫的升高而增加。

    與C18相相比,較短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去鍵合相。此外,低純度的硅膠固定相載體和低表面覆蓋的固定相載體使得一些鍵合相更易于酸解。

    由于使用超高純度的硅膠固定載體粒子以及鍵合相的極高表面覆蓋,ACE鍵合相表現出極高的穩定性。(參見圖9)

    盡管所有ACE鍵合相的穩定性都很優異,但是一些鍵合相并不像其它鍵合相那樣穩定。例如,通常認為C18鍵合比柱長較短的烷基相、PFP相和苯基鍵合相更穩定。

    實際上,典型的苯基固定相穩定性不佳是該相在方法開發中不常被選擇的主要原因之一。

    為了解決這個問題而開發了ACE C18-AR,其允許色譜分析利用強大的π-π和偶極-偶極分離機制,并仍然享有C18相的堅固性及耐用性。

    如圖10所示,ACE C18-AR不僅對典型的苯基鍵合相具有非常優異的穩定性,它甚至還比許多其他C18鍵合相表現出更佳的穩定性。

    類似地,ACE C18-PFP提供了多種分離機制,可以利用它們實現更佳的總體分離效果,同時從C18相的穩定性中受益。

    圖 9:酸穩定性,pH 1.8

    條件

    色譜柱:ACE 4.6 x 150 mm

    流動相:50% CH3CN, 50%水

    流速:1.0 mL/min

    溫度:22 °C

    分析物:菲

    酸性暴露條件:

    流動相:50% CH3CN 50% 0.1%TFA(溶于水中)(pH 1.8)

    流速:1.0 mL/min

    溫度:22 ℃



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