基本方案1.用無菌解剖器械將組織標本放入含有5 mlHBSS及5倍濃度抗生素的35 mm 培養皿中。室溫下放置>30 min。 2.將組織標本轉移至一個新的含有約 2 ml 完全培養基/FBS(補充培養基，如 Chang 培養基，單元 8.2 或 IrvineScientific, 可加快生長速度）。用精細解剖剪和精細鑷或用解剖刀將組織切碎為細小的碎片。 3.用無菌巴氏吸管將組織碎片和盡可能少量的完全培養基/FBS(每個培養瓶約 Iml) 轉入 2 或 3 個 25 cm2 塑料組織培養瓶中，將組織碎片平均分布到整個培養瓶底（最寬的面）。 4.小心將培養瓶直立（底面垂直，蓋朝上），旋緊瓶蓋，培養數小時或過夜。 5.從培養瓶中組織細胞面的相對面加入 4 ml 完全培養基/FBS，小心操作注意不要攪動貼壁的組織碎片，旋緊瓶蓋（防止污染），將培養瓶平放（使組織貼壁的面保持水平），培養 2d。 6.檢查植株是否有污染，培養液變混濁、培養液酸性變強或有明顯的真菌生長均提示有污染。如果沒有污染跡象，將培養瓶蓋旋松繼續培養。 7.5d 后（至 3 周）檢查植株生長情況，如可看到少量細胞，通常為成纖維細胞，在組織碎片周圍生長。 羊膜或一些其他組織培養的細胞可為上皮細胞而不是一般情況下的成纖維細胞。這些細胞（包括成纖維細胞）均不耐胰酶，因此若需制備染色體涂片需盡早收獲。 8.細胞生長過程中每周更換培養基兩次。如果可能的^§沖洗掉大的組織移植片，當數個克隆生長良好且已經進入指數生長期（如有絲分裂細胞呈圓形且游離，克隆間有充足空間）時，可從原代培養直接收獲細胞并按照培養瓶培養羊水的方法（單元 8.2) 制備分裂中期染色體涂片。對染色體涂片進行染色（單元 4.3) 并分析核型 (附錄 3K)。 備選方案 1 用于分裂中期染色體分析的組織樣本的酶裂解法和培養1.將待檢組織分別放入 35 mm培養皿中（每種組織放一個皿）。加入 Iml 膠原酶溶液，消化 lh。 2.用吸管或注射器將含有松解細胞的膠原酶溶液轉移至一個 15 ml 無菌離心管中。蓋上離心管蓋，室溫下放置。在培養皿剩余組織中加入 Iml 胰酶/EDTA 溶液，消化 lh。 3.用一個連有 20 G 針頭或精細巴氏吸管的注射器上下吹打皿內液體，將仍聚集的細胞團打散。將細胞懸液轉移至第 2 步中含有細胞懸液的離心管。 4.加人完全培養基/FBS 至 12 ml。室溫下 70 g 離心 8 min。棄去上清，用 1?2 ml 完全培養基/FBS 重懸細胞沉淀。 5.按照羊水培養方法將細胞懸液滴至 4 張蓋玻片上或分至兩個 25 cm2 培養瓶中培養，Id 后檢查有無污染。收獲前營養培養，按照原位培養法或培養瓶培養法制備分裂中期染色體涂片（單元 8.2)。對染色體涂片進行染色并分析核型。 支持方案 1 妊娠產物標本的培養1.將妊娠產物標本置于無菌或干凈的密閉容器內運送。 2.若立即處理標本，則不需要加入額外的液體，因為標本本身已含有足夠的液體以維持其濕潤。若標本不能立即處理，則需在 24 h 內處理，標本于 4°C 保存不得超過 5d。 不要加人額外液體，不可凍存標本。 3a. 對于較大的且完整的標本，若胎兒部分較易辨別，比如整個的或大塊碎裂的胚胎，則從容器中小心取出標本的胎兒部分置于一大小合適的塑料無菌培養皿或不銹鋼容器中。還應仔細尋找胎盤及胎膜碎片。 注意：雖然大部分樣品未滅菌，所以真正的滅菌是不可能的，但是所有培養皿和設備都要清潔并用酒精滅菌。
3b. 對于較小的或部分的標本，則直接將全部樣本置于一較大培養皿中。用解剖針或精細鑷仔細分離標本，尋找小的胚胎或胚胎部分以及胎盤、胎膜和胳帶碎片。 標本中的大部分可能為母體蛻膜，蛻膜組織不能反映胎兒的基因型，因此不能用。悅膜組織外觀_^是膜狀的，與胎膜相似（如羊膜與絨毛膜），但蛻膜組織非常脆。如果需要可用解剖顯微鏡觀察可疑的胎盤或胚胎組織的碎片以確定它們的來源。胎盤有緘毛分支，可以此區別胎盤與蛻膜。 在較早期且完整的標本中，胚胎組織有可能被完全包裹在絨毛和（或）蛻膜內』則需要切開標本以尋找胚胎組織。 在一些不完整的標本中也有可能無法找到胚胎組織。 4.如果標本為新鮮的未軟化的胎兒，則從四肢采集 2~3 mm3 的肌組織進行培養。如果為防止可能存在的嵌合現象而需要從其他器官取材，而皮膚、腎臟、肺臟和（或）肝臟這些器官的組織均可用于培養。如果標本為新鮮的小胚胎，則一次檢查或拍照取整個樣本的 2~3 mm3 的一部分。如果胚胎或胎兒已軟化，則取 2~3 mm3 的胎膜或域毛碎片。 在很多自然流產及部分人工流產中，胚胎或胎兒可能在排出前數天已經死亡，這將導致胚胎標本變色、質脆且質軟（已軟化），這樣的胚胎標本通常不能達到足夠數量的活力細胞用于培養。在這種情況下蛻膜組織一二胎膜及絨毛通常更有活力。 支持方案 2 皮膚或其他活檢組織標本的培養無菌操作收集活檢組織。用無菌精細鑷和精細剪或解剖刀仔細修剪脂肪組織。將活檢組織置于含有足以覆蓋組織的 HBSS 或無補充培養基的無菌離心管中，如需保存則于 4°C 保存，不可凍存標本。 如需活體取材培養成纖維細胞，通常情況下采取皮膚活檢，需采取直徑 2 mm、深 2 mm 的皮膚組織。外科手術時則可獲得其他來源的組織標本（筋膜或其他結締組織最易培養）；在某些特殊情況下需要研究一些特殊組織（如性染色體嵌合病例中的性腺組織活檢）。這些組織活檢需采取約 3 mm3 的一小片。如果是死產或新生兒死亡病例的尸檢，則可獲得較大部分的組織用于培養。如果沒有其他需特別考慮的因素，深部肌肉組織為最佳選擇。因為深部肌肉組織較皮膚組織不易被污染，且可以在機體死亡后 5~7d 仍有活力。 標本現在可用于制備分裂中期染色體涂片的培養了。培養 3~4d 后應檢查植株向外生長的情況。 絨毛標本直接制備法從自然流產或人工流產中取得的絨毛組織可用于直接制備分裂中期染色體涂片。從絨毛膜絨毛活檢中獲取絨毛組織，按照單元 8.1 中的描述直接制備分裂中期染色體涂片。按照單元 4.3 及附錄 3K 中的描述進行染色和核型分析。 這樣的制備方法不能獲得大量的分裂相且質量不高。但比起以上描述的方法，該方法不需大量培養基及很長的培養時間，且不會有因母體來源細胞的過度生長而導致誤診的可能。直接制備法制備的染色體玻片亦可用于間期核原位雜交來篩查一些非整倍體 展 | 