定量PCR常見問題(一)

1.      定量PCR儀的開關機順序是怎樣的？

    按照正確的開關機順序操作，有助于延長儀器的使用壽命，減少儀器出故障的頻率。開機順序：先開電腦，待電腦完全啟動后再開啟定量PCR儀主機，等主機面板上的綠燈亮后即可打開定量PCR的收集軟件，進行實驗。關機順序：確認實驗已經結束后，首先關閉信號收集軟件，然后關掉定量PCR儀主機的電源，zui后關閉電腦。

2.      哪些種類的反應管和蓋子適合定量PCR實驗使用？有何需要注意的地方？

    定量PCR實驗可以使用以下耗材：96孔光學反應板配合光學膜，0.2 ml光學八聯反應管配合光學膜，0.2 ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋。ABI公司生產的定量PCR耗材的具體使用方法和貨號見下表：

3.      為什么要定期對電腦進行磁盤碎片整理？怎樣整理？

    當運行實時定量PCR儀及使用軟件分析實驗結果時，計算機會刪除并創建若干文件，計算機硬盤的空閑空間會被分割成越來越多的小塊。當硬盤驅動器上文件以分解的碎片存儲時，程序需要更長的時間才能存取文件，因為必須多次尋找文件碎片以存取不同的片斷。碎片整理實用程序將一個文件分解開的多個碎片合并在一起，并存儲到硬盤的同一個位置，從而清除文件碎片，進而優化系統性能。

碎片整理的方法如下：

·         在Windows桌面上，選擇開始(start),我的電腦(My computer)。

·         在(我的電腦)窗口中，用鼠標右鍵單擊硬盤驅動器，并選擇(屬性)property。

·         在(屬性)對話框中選擇工具(Tools)選項卡，單擊開始整理(Defragment now)。

·         單擊碎片整理(Defragment)。

·         當顯示“碎片整理完畢”對話框時，單擊（確定）。

·         在“本地磁盤屬性”對話框中，單擊（確定）。

·         為計算機機中剩余的驅動器重復如上步驟。

4.      何時執行windows service pack更新？

    不要執行該操作。除非美國應用生物系統公司代表通知您更新操作系統，否則請不要更新控制定量 PCR 儀的計算機的操作系統。新版本的 Microsoft Windows 操作系統有可能與SDS 軟件存在沖突，并導致儀器不能正常運行。如果您希望安裝 service pack（更新包）以更新操作系統，應查看隨 SDS 軟件提供的版本說明，避免兼容性問題。

5.      應該備份哪些數據？

    應該定期備份您的實驗數據，備份頻率推薦每周一次，用光盤刻錄。同時您也應該備份定量PCR儀的各種純熒光光譜校正文件、背景文件和安裝驗證實驗數據，這些文件所在的目錄是C：/Appliedbiosystems/SDS Document。下圖是校正文件的樣本。

6.      怎么樣的實驗室環境才能保證儀器設備正常運行？

    良好的實驗室環境有助于延長儀器的使用壽命，減少儀器出故障的頻率。推薦做到以下幾個方面：

    電源：推薦配備合適的UPS或穩壓器。

    通風：儀器的通風應該沒有阻擋。

    溫度：推薦實驗室配備空調，溫度應該控制在10-30°C之間。

    濕度：20-80%；對于潮濕的省份，推薦實驗室配備除濕機。

    空間：易于操作，安全。

7.      怎樣判斷定量PCR儀的樣本加熱塊是否被污染？怎樣清除污染？

    一個辦法是運行背景校正反應板，當一個或多個反應孔連續顯示出不正常的高信號，則表明該孔可能被熒光污染物。另外一種辦法是在不放任何物品到樣本塊上的前提下，執行ROI的校正，當某個孔的信號明顯高出其他孔時，則表明該孔被污染。

    清除樣本加熱塊污染的步驟如下：

    用移液器吸取少量乙醇并滴入每個污染的反應孔中。

    吹打數次。

    將廢液吸入廢液杯中。

    重復以上步驟：乙醇三次，去離子水三次。

    確認反應孔中的殘留液體蒸發完