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  • 發布時間:2022-10-19 12:29 原文鏈接: 實時熒光定量PCR儀的選購要點

    目前購買熒光定量PCR儀系統,一般包括:實時熒光定量PCR儀 +實時熒光定量PCR儀開機檢測試劑+通用電腦+自動分析軟件熒光定量PCR儀組成:溫控模塊、光學系統(光源、檢測器、光路傳導)實時熒光定量PCR儀采購注意事項。

    1.溫控模塊/Peltier

        普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應,均一性差,是上一代的模塊PCR加熱技術,正處于被淘汰的邊緣。

        目前最好的溫控模塊:銀,在金屬中銀的導熱性能較高,升降溫速度快,孔間溫度均一性好,邊緣效應相應減少

        金屬的熱傳導系數表:

        銀 429 >銅 401 > 金 317 >鋁 237  >鐵 80 >錫 67  > 鉛 34.8

        另:單一模塊升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高,因此在溫控模塊升降溫速度對比中,最終是要看樣本的升降溫速度是否快。最大升降溫速度不等與平均升降溫速度。

     2.光源

        光強比較:髙強度白光LED > 鹵鎢燈 >單色LED

        白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右,單色LED的10倍左右,能夠捕捉到更多的熒光信號,是專業光源領域的最新技術代表,2011年開始普遍應用于專業儀器,無論光強、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美,且壽命提升了10倍以上。

        鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩定的問題,其激發能量遠低于白光LED,事實上,無需高端品牌汽車的旗艦概念車,如豐田雷克薩斯,已經開始使用白光LED作為車頭燈。

        壽命比較:髙強度白光LED = 單色LED  >鹵鎢燈

        白光LED的壽命長達10000小時以上,一般可以使用5-10年左右,基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命,基本終身無需更換光源,而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次,費時費力,南方更是不足一年就要更換一次

        另:鹵鎢燈每次運行需要半小時預熱,其中累計散發的熱量對熒光具有明顯的淬滅作用。

     3.檢測器

        熒光定量PCR靈敏度:冷CCD >CCD >光電倍增管 CPM  >光電二極管

        CCD作為熒光信號的接受器,其質量直接決定了儀器的檢測靈敏度和穩定性。

        10℃的冷CCD,和常溫CCD有著質的區別,在專業光學領域,冷CCD的造價成本至少要比常規CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進行光信號捕捉,能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此,有的熒光定量PCR能夠穩定區分1000和2000拷貝的濃度差異,而有的只能做到區分5000和10000個拷貝數。

    4.光路傳導

        光路的傳導光路設計應盡可能有效消除邊緣效應,光路設計是否有效消除邊緣效應,只有實驗才能檢驗

        檢驗方法:96/384孔板中及四角各布置標準品,看差異。

        a 光源直接照射微孔板上:邊緣效應明顯

        b 逐孔移動式采光:無邊緣效應,但需時常校正

        c 散射采光:邊緣效應較明顯,切換光源時需要光源組件移動

        此外,許多實驗室在選購熒光定量PCR儀時可能會遇到這樣的問題:到底選購幾通道的合適呢?目前市面上大部分熒光定量PCR儀在設計時已經固定了熒光通道數,因此大家在選擇儀器時會比較慎重,通道數選少了擔心無法滿足后續新的實驗應用;通道數選多了一是擔心購置預算不足,二是擔心某些通道可能一直閑置,用不上,造成資源浪費。



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