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  • 發布時間:2021-10-30 10:25 原文鏈接: 實時熒光定量PCR儀采購要領!

       目前購買熒光定量PCR儀系統,一般包括:

       實時熒光定量PCR儀 +實時熒光定量PCR儀 開機檢測試劑+通用電腦+自動分析軟件

       熒光定量PCR儀 組成:溫控模塊、光學系統(光源、檢測器、光路傳導)

      采購要領

       1 溫控模塊/Peltier:

       普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應,均一性差,是上一代的模塊PCR加熱技術,正處于被淘汰的邊緣。

       目前最好的溫控模塊:銀,在金屬中銀的導熱性能較高,升降溫速度快,孔間溫度均一性好,邊緣效應相應減少

       金屬的熱傳導系數表:

       銀 429 >銅 401 > 金 317 >鋁 237 >鐵 80 >錫 67 > 鉛 34.8

      另:

       單一模塊升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高,因此在溫控模塊升降溫速度對比中,最終是要看樣本的升降溫速度是否快

       最大升降溫速度不等與平均升降溫速度

       2 光源:

       光強比較:髙強度白光LED > 鹵鎢燈 >單色LED

       白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右,單色LED的10倍左右,能夠捕捉到更多的熒光信號,是專業光源領域的最新技術代表,2011年開始普遍應用于專業儀器,無論光強、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美,且壽命提升了10倍以上。

      鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩定的問題,其激發能量遠低于白光LED,事實上,無需高端品牌汽車的旗艦概念車,如豐田雷克薩斯,已經開始使用白光LED作為車頭燈。

       壽命比較:髙強度白光LED = 單色LED >鹵鎢燈

       白光LED的壽命長達10000小時以上,一般可以使用5-10年左右,基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命,基本終身無需更換光源,而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次,費時費力,南方更是不足一年就要更換一次

      另:

      鹵鎢燈每次運行需要半小時預熱,其中累計散發的熱量對熒光具有明顯的淬滅作用。

       3 檢測器:

       熒光定量PCR靈敏度:冷CCD >CCD >光電倍增管 CPM >光電二極管

       CCD作為熒光信號的接受器,其質量直接決定了儀器的檢測靈敏度和穩定性。

      10℃的冷CCD,和常溫CCD有著質的區別,在專業光學領域,冷CCD的造價成本至少要比常規CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進行光信號捕捉,能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此,有的熒光定量PCR能夠穩定區分1000和2000拷貝的濃度差異,而有的只能做到區分5000和10000個拷貝數。

       4 光路傳導::

       光路的傳導 光路設計應盡可能有效消除邊緣效應,光路設計是否有效消除邊緣效應,只有實驗才能檢驗

       檢驗方法:96/384孔板中及四角各布置標準品,看差異

       其中

       a 光源直接照射微孔板上:邊緣效應明顯

       b 逐孔移動式采光:無邊緣效應,但需時常校正

       c 散射采光:邊緣效應較明顯,切換光源時需要光源組件移動

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