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  • 發布時間:2019-11-01 17:24 原文鏈接: 實用學習丨質譜入門

    近年來質譜儀性能的顯著改進主要基于開發出的兩種離子化技術:一種是介質輔助的激光解吸/離子化技術。另一種是電噴霧離子化技術。由于這兩種電離技術的出現,使原本只能檢測小分支的質譜技術,可以運用于檢測生物大分子。

     

    在過去質譜技術主要運用于對一級結構和序列的表征,而現在質譜技術越來越多地運用于高級結構的分析,而高級結構對于抗體藥物的生物活性至關重要。

     

    隨著抗體藥物的不斷發展,需要對于抗體藥物的結構信息不斷進行深入的分析,質譜技術也隨著這一要求不斷進步。隨著技術的進步,可以預見質譜分析會越來越多地運用于抗體分析中,特別是在高級結構分析的領域,通過質譜分析,可以讓我們更多獲得高級結構的信息,這對于抗體藥物的分析是極為重要的。本文涵蓋了與現代質譜實踐相關的廣泛主題,并回答了有關質譜儀使用和功能的一些常見問題。

     

    質譜簡史

     

    1897年—現代質譜(MS)歸功于英國曼徹斯特JJ Thomson的陰極射線管實驗。

     

    1953年—沃爾夫岡·保羅(Wolfgang Paul)發明的四極和四極離子阱為他贏得了諾貝爾物理學獎。

     

    1968年—馬爾科姆·多爾(Malcolm Dole)開發了當代電噴霧電離(ESI)。在真空中產生氣溶膠會產生蒸氣,這種蒸氣被認為很難實用。液體的體積增加了其冷凝相的100到1000倍(標準條件下1 mL/ min的水將產生1 L / min的蒸汽)。

     

    1974年—Horning在很大程度上基于氣相色譜(GC)技術開發了大氣壓化學電離(APCI),但并未廣泛采用。

     

    1983年— Vestal和Blakely加熱液體流的工作被稱為熱噴涂。它成為當今商業上適用的工具的預兆。

     

    1984年—芬恩在ESI的工作發表,使其在1988年獲得諾貝爾獎。

     

    為什么要使用質譜分析?

     

    醫藥工業領域的工作人員在進行藥物研發和藥物開發時需要利用MS的特異性、動態范圍及其靈敏度,區分復雜基質中緊密相關的代謝物,從而鑒定并量化代謝物。尤其是在藥物的開發過程中,藥物需要進行相應的鑒定、純化,確定早期的藥代動力學,MS已經證實是不可或缺的工具。

     

    生物化學家擴展了MS的使用領域,將其應用到蛋白、肽和寡核苷酸的分析中。使用質譜儀,生物化學家們能夠監測酶的反應,確定氨基酸序列,并通過包含有蛋白裂解片段衍生物樣品數據庫鑒別大分子蛋白。生物化學家通過氫-氘交換在生理條件下形成重要的蛋白-配體的復合物,監測蛋白質的折疊。臨床化學家在藥物檢測和新生兒篩查中也應用MS,取代結果不確定的免疫分析。食品安全和環境研究人員也是這樣。他們跟行業中相關的企業工作人員一樣,也使用MS,比如:PAH和PCB分析,水質量分析,及食品農藥殘留分析。確定油組成是一項復雜且昂貴的工作,這刺激了早期質譜儀的發展,并不斷推動該技術的繼續創新。現今,MS的專業人員可以在各種質譜儀、一系列完善可靠的電離技術中進行選擇。

     

    你在考慮使用質譜儀(MS)之前,應當考慮一下這些問題:您分析的是蛋白質、肽等大分子,還是獲取水溶性小分子的數據?您是在尋找目標化合物,還是表征未知樣品?針對復雜基質,您當前的分離技術能到達所需要的純度嗎,或者您必須開發新的純化方法?您要求單位質量精度(比如400 MW),或5ppm的質量精度(比如,400.0125 MW或質量為400時準確度為2mDa)?這些問題都是應該有所考慮的。

    什么是質譜?質譜是怎樣工作的?

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