正相色譜固定相
正相色譜法是最常用的HPLC分離方法之一,固定相一般采用硅膠、氧化鋁和極性基團鍵合的硅膠等。正相色譜中,溶質在柱中固定相上不斷進行吸附-解吸循環,根據不同被測物在吸附劑上吸附作用的差異而獲得分離。
溶質和固定相間的吸附作用有兩類:
①溶質和溶劑分子對吸附劑表面特定位置的競爭作用,這使得溶劑組成的改變往往會引起分離情況發生很大變化
②溶質所帶官能團與吸附劑表面相應的活性中心之間的相互作用,這種作用與溶質分子的幾何形狀有關,當官能團的位置與吸附中心匹配時,作用較強;反之,則作用較弱。
優良的正相色譜固定相應當具有以下基本特性:
①表面具有極性活性基團,即吸附位點
②具有適宜形狀,最好呈微米級微球形,且粒徑分布均勻
③具多孔性并有高比表面積,以承載較大的樣品負荷
④在操作條件下化學性質穩定
⑤具有高機械強度
⑥價格合理且可穩定供應。