實驗室中識破各種污染拯救細胞的方法

小伙伴們遇到過這種情況嗎？

當您的課題進行到白熱化程度時

卻發現細胞被污染了

此時大家的心情可謂五味雜陳
 

形容一下就是

問君能有幾多愁，眼淚恰似一江春水向東流

不過，別擔心

逍鵬生物煉就火眼金睛

幫助大家識破各種污染，拯救您的細胞
 

我們先來看看污染的真面目，總結下來無非以下幾種類型：
 

我們一起來分析它們的特征：
 

1真菌-深藏不露
 

真菌之所以深藏不露，是因為它們一般不會導致培養基變渾濁，所以在污染早期，很難發現它們的蹤跡。直到長到一定規模后在鏡下可觀察到分叉細絲狀的菌絲（有些呈管狀，樹枝狀，串珠狀的菌絲）（如圖1，圖2）。這類污染中，為首的污染代表是酵母菌：顯微鏡下常見成串的珠狀物，形態呈卵形，大約比細胞小5~10倍，當其進行出芽生殖時，會聚集成連體結構；爆發污染嚴重時，會造成培養基pH值改變，不易除去。
 

圖1. 真菌污染                                                 圖2. 真菌污染
 

逍鵬生物可提供以下解決方案：
 

表1.產品列表

細菌-屢見不鮮
 

細菌種類繁多，分布廣泛，是最容易污染細胞的微生物。
 

細菌在顯微鏡下呈黑色細沙狀（如圖3），典型特征是，可以使培養基在短時間內變成黃色或白色渾濁。細胞形態會出現多角，多核狀況；貼壁細胞不附著，停止生長甚至死亡。
 

圖3. 細菌污染
 

逍鵬生物可提供以下解決方案如上表1：
 

3支原體-無孔不入
 

支原體之所以無孔不入是因為它們種類繁多，常以寄生或腐生營養方式生長，廣泛存在于環境之中。
支原體是細胞培養過程中的常見污染，經常來源于實驗人員（支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道）、動物源血清及胰酶、消毒不完全的器具。其大小只有0.15~0.3μm，所以能通過一般標準的細胞培養過濾方法，0.22μm過濾膜。其污染特征不是很明顯，增長速度相較于細菌比較緩慢，污染初期（輕微）培養基可能依然清澈不會變黃，所以輕微污染時不容易用常規方法（細胞外觀觀察或是DNA染色法）確認。

支原體會緩慢改變細胞形態、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應，它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌體實驗結果偏差。

如下圖所示：
 

圖4. 支原體污染
 

逍鵬生物可提供：支原體檢測/處理/預防全套解決方案。
01. 即用型細胞培養中支原體檢測PCR試劑盒
 

檢測結果如圖：
 

大家可自行根據檢測結果進行對比。

02. 支原體處理試劑
 

03. 支原體預防噴霧
 

支原體檢測/處理/預防全套解決方案
 

表3. 產品列表
 

黑膠蟲-神秘莫測
 

黑膠蟲污染后，在鏡下可看到密密麻麻的小黑點在培養基中自主游動。目前科學界對黑膠蟲的身份并無定論。Dr.Cell 目前檢測的黑膠蟲樣本，62%為細菌，38%為支原體。黑膠蟲在鏡下的典型特征呈卵圓狀、球狀、桿狀等，具有細胞毒性，可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡。
 

點擊進入公眾號查看黑膠蟲游動視頻
 

逍鵬生物可提供以下解決方案：
 

使用三抗（貨號：03-032-1B）結合支原體處理試劑（貨號：03-036和03-037或03-038）有效清除實驗室黑膠蟲污染。
 

5病毒-專一任性
 

病毒之所以“專一任性”是因為其污染和傳播具有細胞專一性，“鐘情”到一輩子吊死在一顆“樹”上。病毒污染可能來自宿主動物細胞或病人，在細胞培養污染物中是相對最難檢測的。被病毒污染的細胞在顯微鏡下能明顯觀察到細胞碎片增多、腫大、圓縮、脫落等病態變形，嚴重時會在單層細胞上觀察到局部破損空斑（如圖5，圖6）。

   圖5. 感染之前                             圖6. 感染24小時后

逍鵬生物提供的解決方案：選用輻照血清以殺滅病毒。

細胞交叉污染-玉石難分
 

細胞交叉污染之所以“玉石難分”是因為其長相和實驗所養的目的細胞形態相似，難以分辨。對于細胞株的交叉污染，曾有文獻報道統計，目前使用的細胞株大約有15~20%不是科學家們所認為的細胞，而在生物醫藥領域中，細胞來源和細胞株身份鑒定檢測的觀念是普遍缺乏的。
 

細胞株的交叉污染，常因不經意的實驗疏忽（不同細胞株分盤時，共享一瓶培養基；槍頭、移液管忘記更換，而造成不同細胞株之間的混合污染；實驗操作人員錄入錯誤細胞株名稱；傳代時的培養皿；冷凍細胞時的凍存管）而發生，繼而造成后續數據搜集錯誤。
 

目前大部分的科學期刊都已有“細胞相關實驗論文發表前，均需附上細胞鑒定報告”的規定（可查閱：文章發表前要求提供細胞鑒定的雜志），以此保證數據來源的正確性。
 

那么如何鑒別呢？細胞身份驗證方式：短串聯重復序列（STR）、同功酶分析、染色體組分型、擴增片段長度多態性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前國際細胞庫（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于細胞株身份鑒定方法。