色譜柱的性能除了與固定相性能有關外,還與填充技術有關。在正常條件下,填料粒度>20um 時,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20um時,濕法填充較為理想。填充方法一般有四種:
①高壓勻漿法,多有用于分析柱和小規模制備柱的填充
②徑向加壓法,Waters ZL
③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱
④干法。柱填充的技術性強,大多數實驗室使用己填充好的商品柱。
必須指出,高效液相色譜柱的獲得,裝填技術是重要環節,但根本問題還在于填料本身性能的優劣,以及配套的色譜儀系統的結構是否合理。.
無論是自己裝填的還是買的色譜柱,使用前都應對其性能進行考察,使用期間或放置一段時間后也要生意重新檢查。柱性能指標包括在一定實驗條件下 (樣品,流動相,流速,溫度)下的柱壓,理論塔板高度和塔板數,對稱因子,容量因子和選擇性因子和選擇性因子的重復性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復性在或以骨。進行柱效比較時,不要注意柱外效應是不有變化。
一份合格的色譜柱評價報告應給出柱的基本參數,如柱長,內徑,填料的種類,粒度,色譜柱的柱效,不對稱度和柱壓降等。