根據Beer定律,物質在一定波長處的吸光度與濃度成正比,這是定量計算的依據。但是很多溶劑本身在紫外區有吸收峰或末端吸收,選用溶劑時應考慮溶劑本身吸收的干擾。選擇溶劑時,被測組分的測量波長必須大于溶劑的截止波長。
常用的定量分析方法有標準曲線法、標準對照法、吸光系數法及差示分光法等,以下介紹前三種方法。
1)標準曲線法
標準曲線法又稱工作曲線法或校正曲線法。標準曲線法較簡單,在儀器分析中應用廣泛,對儀器的精度要求不高,適合分析大批量的同類試樣,但不適合分析組成復雜的樣品。對于同一臺儀器,在確定的工作狀態和測定條件下,吸光度A與溶液濃度c之間呈線性關系。

標準曲線
①測定方法
首先配制一系列不同濃度的對照品溶液(或稱標準溶液),在相同條件下分別測定吸光度。以濃度為橫坐標,相應的吸光度為縱坐標,繪制標準曲線(如上圖),或根據二者的數值建立回歸方程得A=bc+a。在相同的條件下測定試液的吸光度,從標準曲線或回歸方程中求出被測組分的濃度。
②采用標準曲線法應注意的問題
(1)制備一條標準曲線至少需要5~7個點,并不得隨意延長
(2)待測溶液濃度應在標準曲線線性范圍內。
(3)待測溶液和對照品溶液必須在相同條件下進行測定。
根據Beer定律,理想的標準曲線應該是一條通過原點的直線。實際上,常有標準曲線不
通過原點的現象。其原因主要有幾方面,如空白溶液的選擇不當,顯色反應的靈敏度不夠,吸收池的光學性能不一致等,應采取適當措施加以改善。
2)標準對照法
如果繪制的標準曲線是通過原點的,測定試樣時也可采用一種簡化的方法,即標準對照法。
在相同條件下配制標準溶液(s)和樣品溶液(x),在選定波長處,分別測其吸光度,根據Beer定律A=Ecl,因標準溶液和樣品溶液是同種物質、同臺儀器及同一波長于厚度相同的吸收池中測定,故l和E均相等,因此Cx=Ax Cs/As。
應用標準對照法的前提是繪制標準曲線需過原點,且一般要求標準溶液與樣品溶液的濃度盡量接近,否則會引起較大的誤差。
3)吸收系數法
根據Beer定律,若已知厚度l和吸光系數或百分吸收系數,即可根據供試品溶液測得的A值求出被測組分的濃度。C=A/El
許多化合物的吸收系數或百分吸收系數可以從有關手冊或文獻中查到。也可以將供試品溶液的吸光度換算成樣品的百分吸收系數或摩爾吸收系數,然后與純品的吸收系數相比計算出樣品中被測組分含量。
如果查不到被測物質的吸收系數,或測定條件與手冊、文獻中不盡相同,則不能采用吸收系數法進行測定。