當混合物隨流動相流經色譜柱時,就會與柱中固定相發生作用(溶解、吸附等),由于混合物中各組分物理化學性質和結構上的差異,與固定相發生作用的大小、強弱不同,在同一推動力作用下,各組分在固定相中的滯留時間不同,從而使混合物中各組分按一定順序從柱中流出。
這種利用各組分在兩相中性能上的差異,使混合物中各組分分離的技術,稱為色譜法。