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  • 發布時間:2019-04-21 22:01 原文鏈接: 實驗室常用技術參數資料(二)

    二、常用緩沖液

      1.分子克隆常用緩沖液

      2.磷酸緩沖液

      (1)25℃下0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制※

    pH

    1mol/L K2HPO4(ml)

    1mol/L KH2PO4(ml)

    5.8

    8.5

    91.5

    6.0

    13.2

    86.8

    6.2

    19.2

    80.8

    6.4

    27.8

    72.2

    6.6

    38.1

    61.9

    6.8

    49.7

    50.3

    7.0

    61.5

    38.5

    7.2

    71.7

    28.3

    7.4

    80.2

    19.8

    7.6

    86.6

    13.4

    7.8

    90.8

    9.2

    8.0

    94.0

    6.2

      (2)25℃下0.1mol/L磷酸鈉緩沖液的配制※

    pH

    1mol/L Na2HPO4(ml)

    1mol/L NaH2PO4(ml)

    5.8

    7.9

    92.1

    6.0

    12.0

    88.0

    6.2

    17.8

    82.2

    6.4

    25.5

    74.5

    6.6

    35.2

    64.8

    6.8

    46.3

    53.7

    7.0

    57.7

    42.3

    7.2

    68.4

    31.6

    7.4

    77.4

    22.6

    7.6

    84.5

    15.5

    7.8

    89.6

    10.4

    8.0

    93.2

    6.8

      ※:用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000ml,根據Henderson-Hasselbalch方程計算其pH值:

      pH=pK’+1g([質子受體]/[質子供體])

      在此,pK’=6.86(25℃)。

      3.電泳緩沖液

      測序凝膠加樣緩沖液

      98%去離子甲酰胺

      10mol/L EDTA(pH8.0)

      0.025%二甲苯青FF

      0.025%溴酚藍

      甲酰胺:許多批號的試劑級甲酰胺,其純度符合使用要求,無須再進行處理。不過,一旦略呈黃色,則應用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Dowex XG8混合床樹脂共同攪拌1小時進行去離子處理,并用Whatman 1號濾紙過濾2次,去離子甲酰胺分裝成小份,充氮存于-70℃。

    常用的電泳緩沖液

    緩沖液

    使用液

    濃貯存液(每升)

    Tris-乙酸(TAE)1×:0.04mol/L Tris-乙酸50×:242g Tris堿

    0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸


    100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
    Tris-磷酸(TPE)1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris堿

    0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)


    40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
    Tris-硼酸(TBE)a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×:54g Tris堿

    0.001mol/L EDTA27.5硼酸


    20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
    堿性緩沖液b1×:50mmol/L NaOH1×:5ml 10mol/L NaOH

    1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
    Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris

    250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸(電泳級)(pH8.3)

    0.1% SDS50ml 10% SDS(電泳級)

      說明:

      ①TBE溶液長時間存放后會形成沉淀物,為避免這一問題,可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液,出現沉淀后則予以廢棄。

      以片都以1×TBE作為使用液(即1:5稀釋濃貯液)進行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1:10稀釋的貯存液作為使用液。

      進行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小, 故通過緩沖液的電流量通常較大,需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。

      ②堿性電泳緩沖液應現用現配。

      ③Tris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

      2×SDS凝膠加樣緩沖液:

      100mmol/L Tris·HCl(6.8)

      200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)

      4%SDS(電泳級)

      0.2%溴酚藍

      20%甘油

      不含DTT的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫,應在臨用前取1mol/L貯存液現加于上述緩沖液中。

      4.凝膠加樣緩沖液

    緩沖液類型

    6×緩沖液

    貯存溫度


    Ⅰ

    0.25%溴酚藍


    4℃

    0.25%二甲苯青FF
    40%(W/V)蔗糖水溶液


    Ⅱ

    0.25溴酚藍


    室溫

    0.25%二甲苯青FF
    15%聚蔗糖(Ficoll400)


    Ⅲ

    0.25%溴酚藍


    4℃

    0.25%二甲苯青FF
    30%甘油水溶液


    Ⅳ

    0.25%溴酚藍


    4℃

    40%(W/V)蔗糖水溶液

    堿性加樣緩沖液:
    300mmol/L NaOH
    6mmol/L EDTA


    Ⅴ

    18%聚蔗糖(Ficoll400)


    4℃

    0.15%溴甲酚綠
    0.25%二甲苯青FF

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