二、常用緩沖液
1.分子克隆常用緩沖液
2.磷酸緩沖液
(1)25℃下0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制※
pH | 1mol/L K2HPO4(ml) | 1mol/L KH2PO4(ml) |
5.8 | 8.5 | 91.5 |
6.0 | 13.2 | 86.8 |
6.2 | 19.2 | 80.8 |
6.4 | 27.8 | 72.2 |
6.6 | 38.1 | 61.9 |
6.8 | 49.7 | 50.3 |
7.0 | 61.5 | 38.5 |
7.2 | 71.7 | 28.3 |
7.4 | 80.2 | 19.8 |
7.6 | 86.6 | 13.4 |
7.8 | 90.8 | 9.2 |
8.0 | 94.0 | 6.2 |
(2)25℃下0.1mol/L磷酸鈉緩沖液的配制※
pH | 1mol/L Na2HPO4(ml) | 1mol/L NaH2PO4(ml) |
5.8 | 7.9 | 92.1 |
6.0 | 12.0 | 88.0 |
6.2 | 17.8 | 82.2 |
6.4 | 25.5 | 74.5 |
6.6 | 35.2 | 64.8 |
6.8 | 46.3 | 53.7 |
7.0 | 57.7 | 42.3 |
7.2 | 68.4 | 31.6 |
7.4 | 77.4 | 22.6 |
7.6 | 84.5 | 15.5 |
7.8 | 89.6 | 10.4 |
8.0 | 93.2 | 6.8 |
※:用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000ml,根據Henderson-Hasselbalch方程計算其pH值:
pH=pK’+1g([質子受體]/[質子供體])
在此,pK’=6.86(25℃)。
3.電泳緩沖液
測序凝膠加樣緩沖液
98%去離子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚藍
甲酰胺:許多批號的試劑級甲酰胺,其純度符合使用要求,無須再進行處理。不過,一旦略呈黃色,則應用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Dowex XG8混合床樹脂共同攪拌1小時進行去離子處理,并用Whatman 1號濾紙過濾2次,去離子甲酰胺分裝成小份,充氮存于-70℃。
常用的電泳緩沖液
緩沖液 | 使用液 | 濃貯存液(每升) |
| Tris-乙酸(TAE) | 1×:0.04mol/L Tris-乙酸 | 50×:242g Tris堿 |
| 0.001mol/L EDTA | 57.1ml冰乙酸 | |
| 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| Tris-磷酸(TPE) | 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 | 10×:10g Tris堿 |
| 0.002mol/L EDTA | 15.5ml85%磷酸(1.679g/ml) | |
| 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| Tris-硼酸(TBE)a | 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 | 5×:54g Tris堿 |
| 0.001mol/L EDTA | 27.5硼酸 | |
| 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) | ||
| 堿性緩沖液b | 1×:50mmol/L NaOH | 1×:5ml 10mol/L NaOH |
| 1mmol/L EDTA | 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) | |
| Tris-甘氨酸c | 1×:25mmol/L Tris | 5×:15.1g Tris |
| 250mmol/L 甘氨酸 | 94g 苷氨酸(電泳級)(pH8.3) | |
| 0.1% SDS | 50ml 10% SDS(電泳級) |
說明:
①TBE溶液長時間存放后會形成沉淀物,為避免這一問題,可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液,出現沉淀后則予以廢棄。
以片都以1×TBE作為使用液(即1:5稀釋濃貯液)進行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1:10稀釋的貯存液作為使用液。
進行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小, 故通過緩沖液的電流量通常較大,需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。
②堿性電泳緩沖液應現用現配。
③Tris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
2×SDS凝膠加樣緩沖液:
100mmol/L Tris·HCl(6.8)
200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)
4%SDS(電泳級)
0.2%溴酚藍
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫,應在臨用前取1mol/L貯存液現加于上述緩沖液中。
4.凝膠加樣緩沖液
緩沖液類型 | 6×緩沖液 | 貯存溫度 |
| 0.25%溴酚藍 |
|
| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 40%(W/V)蔗糖水溶液 | ||
| 0.25溴酚藍 |
|
| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 15%聚蔗糖(Ficoll400) | ||
| 0.25%溴酚藍 |
|
| 0.25%二甲苯青FF | ||
| 30%甘油水溶液 | ||
| 0.25%溴酚藍 |
|
| 40%(W/V)蔗糖水溶液 | ||
| 堿性加樣緩沖液: | ||
| 300mmol/L NaOH | ||
| 6mmol/L EDTA | ||
| 18%聚蔗糖(Ficoll400) |
|
| 0.15%溴甲酚綠 | ||
| 0.25%二甲苯青FF |