2.2.6 連接酶酶促鏈式反應(LCR)
LCR是基于靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴增技術，是繼PCR后新發展的一種較有前景的體外擴增技術。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標序列雜交，當該2段DNA探針與沒有發生突變的模板褪火后，如果2探針是緊鄰的，中間沒有核苷酸間隔，則可在連接酶作用下連接起來，連接以后的新鏈又可以作為模板，引導下一周期的連接產生新的子鏈。若連接區段發生核苷酸的堿基突變，則連接反應不能發生，擴增反應終止。
3、目前檢測技術的不足
細胞培養的方法檢測HIV專一性強，不會出現假陽性，對于確認那些抗原/抗體檢測不確定的個體和陽性母親新生兒是否感染HIV有著重要的意義。但是須要有一定數量的感染細胞存在才能培養和分離出病毒來，因而敏感性差、操作時間長、操作復雜，必須在特定的P3實驗室中才能進行，且費用較高(每次培養需要約200～500美元)，不適用于臨床。
p24抗原檢測能夠在病毒開始復制后檢測到血液中的可溶性p24抗原，但易出現假陽性。因此，陽性結果必須經中和試驗確認，該結果才可作為HIV感染的輔助診斷依據。HIV 1 p24抗原檢測陰性，只表示在本試驗中無反應，不能排除HIV感染。
病毒核酸檢測方法具有很高的靈敏度，對疾病進展的監測、抗病毒療效觀察和耐藥性監測非常重要。但是，由于HIV基因的多樣性，沒有一套引物可以覆蓋所有的HIV序列，使檢測的敏感性又受到限制；此外現有的病毒核酸檢測方法或是檢測儀器、檢測試劑昂貴，或是操作復雜，對操作人員要求高，既難以在一般實驗室推廣，又不適用于對大量患者的快速檢測，同樣不適合廣泛的臨床應用。
因此，既要提高檢測的敏感性、特異性，縮短窗口期，又要簡便、快速和降低成本已成為HIV檢測技術發展的要求和方向，很多的研究正致力于尋找病毒檢測的替代技術。
4、HIV檢測技術的進展
近年來，HIV檢測技術取得了很大進展。如發展了ICD p24抗原測定法(immunecomplex
disassociate，免疫復合物解離，ICD)、第四代HIV檢測試劑、超敏感EIA、線性免疫酶測定(lineal
immunoenzymatic assay)等，使檢測出HIV感染的時間大大提前。
4.1 HIV檢測試劑的發展
從1985年第1代HIV抗體檢測試劑問世到現在，HIV血清學檢測試劑已經發展到了第4代。第4代ELISA試劑的優點在于能同時檢測抗原和抗體，降低血源篩查的殘余危險度。與第3代抗HIV
1/2試劑相比，檢出時間提前了4～5d，窗口期縮短了1周多，在對艾滋病早期診斷的效果上明顯優于第3代。
但使用第4代試劑對艾滋病毒進行檢測，仍然有2～3周的窗口。此外，由于把抗原和抗體同時包被在反應板上，存在著相互干擾的可能，影響了免疫反應的特異性。而且由于第二窗口期的存在，也使得檢測的敏感性受到影響。一般來講，使用第4代試劑檢測p24抗原，其靈敏度(20～100
pg/mL)遠遠低于單獨檢測抗原抗體分析法(3.5～10
pg/mL)。從方法學上來講，這種基于ELISA的分析方法，靈敏度終歸是有限的。相對化學發光和時間分辨熒光免疫分析技術等更先進的分析方法，它的靈敏度比較低。由此可見，提高敏感性、特異性、縮短窗口期和簡便快速是HIV檢測試劑未來發展的主要趨勢。
4.2 病毒檢測方法的發展
4.2.1 核酸檢測方法研究進展
隨著分子生物學技術的發展，核酸檢測越來越受到人們的重視并將其與抗原抗體反應的高特異性結合起來形成了免疫PCR技術。這一技術具有特異性強和靈敏度高的特點，可用于單個抗原的檢測。這促進了應用PCR技術進行HIV核酸檢測的快速發展。自2001年起，COBAS Ampliscreen HIV 1 Test等4種HIV核酸檢測技術通過了FDA的批準，作為進篩選分析技術來進行HIV 1的檢測。最近，實時熒光PCR檢測技術的應用使HIV核酸檢測技術又進入到一個新境界。通過這種技術，不但可以進行定性檢測，更重要的是可以進行定量檢測。Barletta等將這一技術應用到HIV的檢測中，大大降低了病毒載量的檢測限(0.66個拷貝相當于0.33個病毒粒子)。2002年4月國家藥品監督管理局(SDA)批準了第一個HIV熒光PCR檢測試劑盒。