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  • 發布時間:2020-07-27 12:38 原文鏈接: 實驗常用試劑的制備與儲藏(二)

    100×Denhardt試劑(Denhardt's regent)
        

     

     

     

     

    依照上表稱取各組分,溶于水中定容。過濾除菌及雜質,分裝成小份于-20℃貯存。
      10×標準DNA連接酶緩沖液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端連接)

     

     

     

     

     

     

     

    將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于-20℃ 。
      100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)
      可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液,-80℃可貯存至少6個月。
      10mmol/L dNTP混合液

     

     

     

     

     

     

    20%PEG 8000/2.5M NaCl

     

     

     

     

    加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中,加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。
      20×SSC

     

     

     

     

    溶解檸檬酸三鈉(二水)和氯化鈉于約0.9L水中,加幾滴10N NaOH溶液調pH為7.0,用水補足體積至1L。
      DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水
      加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15 psi
      條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應,不可用DEPC處理Tris緩沖液。
      甲酰胺(deionized formamide)
      直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經Whatman
      1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮氣于-80℃貯存(防止氧化)。
      磷酸緩沖液(phosphate buffer)
      按照下表所給定的體積,混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉(單堿)和1mol/L 磷酸氫二鈉(雙堿)貯液,獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L
      的磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O)貯液:溶解138g于足量水中,使終體積為1L;1mol/L
      磷酸氫二鈉(Na2HPO4)貯液:溶解142g于足量水中使終體積為1L。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    TE(用于懸浮和貯存DNA)

     

     

     

     

    Tris緩沖液(Tris-HCl buffer)
      將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中,再根據所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調整終體積至1L。

     

     

     

     

     

     

     


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