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  • 發布時間:2020-04-03 20:18 原文鏈接: 宿主殘留蛋白HCPELISA抗體覆蓋率檢測的應用

    現今許多生物藥物(抗體、疫苗、重組蛋白等)的制備還是通過生物體系合成,諸如非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)和中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,大腸桿菌等,這些細胞稱為宿主細胞。盡管已經采用多種純化方式,但是在生物藥物中還是可能會有微量的宿主蛋白殘留(HCP)。由于HCP殘留可能對生物藥物的安全性和藥效性能產生一定影響,因此,精準的HCP檢測對于控制生物藥物的質量和安全尤為重要。如:

    目前,檢測HCP應用最廣泛、最有實用價值的方法就是采用ELISA方法,它檢測的是總HCP組分,重復性好,靈敏度高,便于設定檢測限度和建立技術規范。但是ELISA方法檢測也有一定的局限性,比如HCP成分不一,每一種蛋白成分含量也不一致,作為免疫原產生抗體的能力也不相同,所以由此制備的抗HCP抗體并不能完全檢測HCP中所有成分,因此會有“漏檢”,所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率(Coverage)。


    HCP ELISA抗體覆蓋率的評估方法一般會采用雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和蛋白質免疫印跡(Western Blot,WB)技術結合的辦法。將分別得到的HCP總蛋白分離圖像和HCP抗體結合的圖像放在一起疊加、匹配膠點、分別記錄匹配和未匹配的膠點數量,計算覆蓋率結果。現在還會使用2D-DIGE技術進行HCP抗體覆蓋率的檢測,例如使用cy3標記總蛋白,使用cy5標記的anti-HCP的二抗,這樣最后可以最后一起檢測,不用跑兩塊膠,節省時間和試劑花費成本等。


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