| 實驗步驟 | 1. 讓懸液中大的組織團塊沉降。
2. 把 9 ml 的細胞懸液(細胞團盡量少)加在6 ml 的Ficoll (Ficoll/metrizoate 調至 1.077 g/ml)泛酸溶液上面,此步驟應在廣口、透明有蓋的離心管中進行,如 25 ml 無菌離心管或Nunclon 普通容器(清澈光亮的離心管或常規容器),或 Corning 50 ml 透明的塑料管,體積應兩倍于上述溶液的體積。
3. 400 g (在界面中間測量),離心15 min 。
4. 小心吸去上層液體勿破壞界面。
5. 用注射器(帶有鈍的插管或平針頭)或巴斯德吸管或移液器小心收集交界面液體。
6. 用培養基(如 DMEM/F12 , 含1 0 % 胎牛血清)將混合液稀釋至 20 ml。
7. 混合液以 70 g 離心 10 min。
8. 去除上清液,用 5 ml 生長培養基重懸細胞小團。
9 . 重復步驟 7 和 8 使細胞不含密度培養基。
10. 用血球計數板或電子計數儀計數細胞。
11. 接種至培養瓶中培養。 展開 |
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