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  • 發布時間:2019-04-03 20:58 原文鏈接: 富集活細胞

    實驗方法原理在 25 ml 縲口蓋離心管中加人6 ml Ficoll-Hypaque溶液,將 9 ml 含 2×107 個細胞的培養基加在上面,離心,從交界部位收集活細胞。
    實驗材料

    細胞懸液D-PBSA

    試劑、試劑盒

    Ficoll-Hypaque溶液或其他類似物

    儀器、耗材

    離心管或常規容器生長培養基注射器移液管細胞計數器離心機

    實驗步驟

    1. 讓懸液中大的組織團塊沉降。

    2. 把 9 ml 的細胞懸液(細胞團盡量少)加在6 ml 的Ficoll (Ficoll/metrizoate 調至 1.077 g/ml)泛酸溶液上面,此步驟應在廣口、透明有蓋的離心管中進行,如 25 ml 無菌離心管或Nunclon 普通容器(清澈光亮的離心管或常規容器),或 Corning 50 ml 透明的塑料管,體積應兩倍于上述溶液的體積。

    3. 400 g (在界面中間測量),離心15 min 。

    4. 小心吸去上層液體勿破壞界面。

    5. 用注射器(帶有鈍的插管或平針頭)或巴斯德吸管或移液器小心收集交界面液體。

    6. 用培養基(如 DMEM/F12 , 含1 0 % 胎牛血清)將混合液稀釋至 20 ml。

    7. 混合液以 70 g 離心 10 min。

    8. 去除上清液,用 5 ml 生長培養基重懸細胞小團。

    9 . 重復步驟 7 和 8 使細胞不含密度培養基。

    10. 用血球計數板或電子計數儀計數細胞。

    11. 接種至培養瓶中培養。

    展開 
    注意事項

    使用人的或其他靈長類的材料,不要用尖針或玻璃巴氏吸管。


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