寄生蟲病是臨床常見的疾病,不但對廣大人民群眾的健康造成很大危害,而且影響到畜牧業的發展。寄生蟲的實驗診斷包括對受感染的機體進行檢測和病原體的特性進行檢驗,實驗室檢驗在寄生蟲病的診斷中起著極其重要的作用。常規病原學檢查是直接檢驗受感染者的糞便、血液、組織液鏡檢或體外培養后再鏡檢以得到寄生蟲為確診依據。近些年來,這種傳統的方法越來越少用,免疫學或分子生物學寄生蟲診斷方法在臨床上得到了迅速的發展。
寄生蟲是一病原體,如單細胞生物(原蟲)或蠕蟲,它們通過寄生于其他生物體(宿主)內以得以生存。寄生蟲病是臨床常見的疾病,不但對廣大人民群眾的健康造成很大危害,而且影響到畜牧業的發展。我國幅員遼闊,地跨亞熱帶和南、北溫帶,生境復雜,氣候多樣,寄生蟲的種類比較復雜和多樣。寄生蟲的實驗診斷包括對受感染的機體進行檢測和病原體的特性進行檢驗,如檢測抗體、抗原、酶、核酸。傳統的檢測方法和現代技術發展而來的免疫學和分子生物學在臨床應用中都有優缺點,如直接境檢簡單、快速,但其準確性和局限性是其缺點,本文就其進行淺析。
1.傳統的檢測方法
糞便生理鹽水直接涂片法、薄血膜法、沉淀法、飽和鹽水浮聚法、厚血膜法、厚涂片法等諸多傳統的實驗室檢查方法至今仍在寄生蟲的診斷中扮演著重要的角色。在寄生蟲感染中,在患者的體液或分泌排泄物中找到蟲體、包囊、卵囊或蟲卵,或在患者病變部位的組織活檢標本中找到蟲體或蟲卵而確診,可謂是臨床診斷的“金標準”。根據寄生蟲的種類和在人體的發育階段和寄生部位的不同,可采集相應的標本,如糞便、血液、尿液、痰液、陰道分泌物等,采取不同的檢查方法。
對于多數的蠕蟲和節肢動物,常肉眼可見,通常只需要根椐其標本來源和形態特征即可做出初步判斷,如蛔蟲;肉眼不能發現的原蟲的檢測多需要借助于顯微鏡,如隱孢子蟲病患者可應用改良耐酸染色法或金胺一酚染色法檢測其糞便,找到卵囊進而確診,阿米巴痢疾患者則可在其新鮮糞便中帶血的部分找到溶組織內阿米巴滋養體而確診。
2.免疫學檢測
隨著科學技術的不停發展,免疫學檢查在寄生蟲病診斷中展現出越來越重要的價值,特別是診斷人體內不能發育成熟的寄生蟲,可以彌補病原學檢查的不足,隨著高新技術的介入、診斷標準的標準化,免疫學檢測已顯示出高度的特異性、敏感性、重現性、實用性。
各蟲種、蟲株之間和寄生蟲生活史不同發育階段的抗原既有相同抗原,還有不同抗原是進行免疫學檢查的基礎。對于寄生蟲的感染部位為深部器官或組織,或是早期感染、輕度感染、隱性感染或在晚期局部組織纖維化甚至成蟲已死亡等情況,使病原檢查十分困難,通過對血清中的抗原或抗體進行免疫學檢測來幫助診斷,體現其臨床的實用性。應用于免疫學診斷的抗原有蟲體抗原、排泄分泌抗原和膜抗原等,按其處理的情況不同可分為粗抗原、純化抗原、固相抗原。蟲體抗原是最常用的抗原,大致可分為整體抗原和可溶性抗原。整體抗原包括蟲體、幼蟲和蟲卵。
循環抗原是指是指寄生蟲寄生在在生長發育過程中釋放到宿主血液、分泌液或排泄物中,且具有抗原活性的蟲源性物質,用免疫學方法可由宿主血清、腦脊液、胸腹水、乳汁、尿液等中檢測到,其生化組成多為蛋白質或糖蛋白。這種檢查手段在臨床上應用越來越廣,其釋放量與寄生蟲的感染程度成正比,且提示宿主體內有活的成蟲。
常用的檢查手段包括皮內試驗、環卵沉淀試驗、酶聯免疫吸附試驗、間接熒光抗體試驗、間接紅細胞凝集試驗、膠乳凝集試驗、免疫印跡技術、免疫層析技術等,可將以上的方法大體歸納為皮內反應和血清學試驗。皮內試驗是將蟲體或蟲卵制備成可溶性抗原,稀釋后進行皮內注射,通過形成的皮丘結果來判斷陽性或陰性,陽性者對該病的診斷具有初步篩選的價值,該法簡便、快速,但應注意的是存在多種寄生蟲病之間的交叉反應。
3.分子生物學方法
3.1 DNA探針
DNA探針技術又被叫做分子雜交技術,是利用DNA分子的變性、復性以及堿基互補配對的高度精確性,對寄生蟲某一特異性DNA序列進行探查的技術。通常是用同位素或生物素標記的特定片段作探針,與被檢品的DNA或片段進行雜交,再通過放射自顯影或酶檢測方法檢測雜交反應的結果。DNA探針方法的優點是其敏感性和特異性高,且操作簡單快速,目前臨床上多應用于瘧疾、陰道毛滴蟲感染、賈第蟲病、絲蟲病、利什曼原蟲病、弓形蟲病等的診斷。
3.2 聚合酶鏈反應(PCR)技術
PCR已用于多種寄生蟲病診斷,PCR技術具有簡易、快速、靈敏和高效等優點。PCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火和適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得到迅速擴增。臨床上用于瘧原蟲、絲蟲、利什曼原蟲、弓形蟲、溶組織內阿米巴、錐蟲、陰道毛滴蟲、結節線蟲、微孢子蟲等的檢測。
綜上所述,寄生蟲病是臨床常見病,實驗室診斷在其診斷中扮演者重要的角色,主要包括傳統的鏡檢、免疫學檢測和分子生物學的檢測,他們各有優缺點,因此臨床應注意鑒別。