對流免疫電泳實驗

實驗方法原理

對流免疫電泳是在瓊脂擴散基礎上結合電泳技術而建立的一種簡便而快速的方法。此方法能在短時間內出現結果，故可用于快速診斷，敏感性比雙向擴散技術高10~15倍。

實驗材料 待檢血清

試劑、試劑盒 瓊脂巴比妥緩沖液生理鹽水

儀器、耗材 電泳儀離心機打孔器微量進樣器

實驗步驟

1.  瓊脂板的制備根據需要可選用大玻板（6厘米×9厘米）和（小玻片）兩種。大玻板約需瓊脂10毫升，小玻片約需3.5毫升，凝固后按圖打孔，方法同瓊脂擴散試驗。

2.  加樣：左側孔內加患者血清（原血清及10倍稀釋血清各占一孔），右側內加抗血清，每片應有陽性對照。

3.  電泳

用國產普通電泳儀。其內加0.05 m PH8.6的巴比妥緩沖液，加至電泳槽高度的三分之二處，注意兩槽內液面盡量水平。將加好樣品的玻板置于電泳槽上，抗原端接負極，抗體端接正極，用2~4層濾紙浸濕作鹽橋，濾紙與瓊脂板聯接處為0.5厘米。以板寬度計算電流，以板的長度計算電壓。要求電流量為2~3毫安/厘米，即大板為20毫安，小板為10毫安。電壓為4~6伏/厘米。通電45分鐘~2小時后觀察結果。

4.  結果觀察：在黑色背景上方，用散射光多個角度觀察，在對孔之間有白色沉淀線即為陽性對照應出現明顯的白色沉淀線。如果抗原，兩極微沉淀條紋不清晰，于37℃保溫數小時可增強沉淀條紋的清晰度。

5.  影響結果的因素

（1） 抗原抗體的比例：抗原抗體比例適應時容易出現沉淀帶，反之不易發生。當抗體濃度恒定時，被檢血清含甲胎蛋白濃度高時，作10倍、20倍或更高倍數稀釋可以提高陽性率。隨稀釋度的增加，抗原抗體的比例發生變化，沉淀線由靠近抗血清孔向逐步移向兩孔中間，并可出現不典型的沉淀線如弧形、八字須形、斜線形，這些也是陽性，應予注意。

（2） 幾組電泳緩沖液其電泳結果以巴比妥鈉—鹽酸緩沖液靈敏度最高。巴比妥—巴比妥鈉次之。Tris緩沖液更差。

（3） 電壓與電流時電泳時間需要長些：電壓電流增大時，電泳時間可更短。但電壓過高則孔徑變形，電流過大抗原抗體蛋白易變性，干擾實驗結果。一般選擇每厘米5毫升，電泳時間改為1.5小時。