小耗材大智慧之液相色譜柱（二）

四、常用色譜柱

我們常見的色譜柱品牌有waters、安捷倫、賽默飛、島津、shodex、大賽璐、還有被大曹三耀收購的資生堂，國內品牌比較出名的就是月旭、依利特了。

我們再看看各種各樣的鍵和相都是啥。

這么多的鍵和相到底應該怎么選，有沒有規律呢，必須有啊，往下瞅瞅。

又想起了化學老師那句萬能的箴言：“結構決定性質，性質決定用途。”結構和性質還決定了這伙計需要用什么柱子分離。

了解被分離物有何區別?有無可電離集團?電離常數?PH如何影響色譜分析?比如下圖PH對分離的影響。

常規的硅膠基質色譜柱不能耐受高PH，可以選擇雜化硅膠顆粒或者聚合物基質的色譜柱，多點鍵和的色譜柱在高PH下也會比單點鍵和的色譜柱壽命更長。下圖便是某位小姐姐家的色譜柱在高PH下硅膠溶解的圖片。

五、如何更好的使用色譜柱，延長柱壽命?

1、拿到色譜柱后先閱讀說明書，了解色譜柱的具體性能：耐受溫度、耐受PH等。以及色譜柱的沖洗和保存條件。經過柱校測試確認色譜柱本身沒有問題后方可正常使用。

2、樣品充分前處理，確保樣品的潔凈;使用保護柱或在線過濾器，根據實際情況更換保護柱芯或濾片。

3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。

4、應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中如果流動相中使用了緩沖鹽，避免出現鹽析。

5、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞，PH過低共價鍵斷裂，鍵和相水解;PH過高硅膠溶解。

6、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，或出現污染，選擇適當的條件沖洗或反沖。

適用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱體積的含有≥30%誰的極性郵寄溶劑(如乙腈)作為流動相除去柱子中的緩沖鹽;使用至少20倍柱體積的含有95%極性郵寄溶劑(如乙腈)沖洗色譜柱。

污染物的去除常規星期后柱校沒有明顯恢復時，使用50%異丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱體積以除去污染物。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的反相色譜柱沖洗的參考意見)

適用于氨基柱、氰基柱

常規清洗：乙腈：水=60;40條件對色譜柱進行沖洗，清洗時不建議水相比例超過40%，過高使用水相容易導致鍵和相水解。

色譜柱再生：當色譜柱經過長期使用，柱校降低時，可以對色譜柱進行再生，乙腈：水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30倍柱體積。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)

適用于離子交換柱SCX、SAX沖洗方法

日常沖洗：用100%水沖洗30個柱體積除鹽，然后用20%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在20%甲醇或乙腈中。

長期保存：用100%水沖洗30個柱體積去除鹽，然后用50%乙腈;50%水沖洗20個柱體積后保存在50%乙腈：50%水中。

再生：先用高濃度的緩沖鹽(不超過1M)，然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇沖洗，再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根據實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見)

色譜柱是個很厲害的角色，希望有機會我們一起探討!