預雜交液的制備：根據要雜交的膜的數量配制預雜交液，每25 ml預雜交液（1~2張膜）的成分組成如下：
| H2O | 15 ml |
| 20×SSPE | 6.25 ml |
| 50×Denhardt | 2.5 ml |
| 10% SDS | 1.25 ml |
| 100 mg/ml鮭魚精DNA（緩加） | 400 ml |
1 取適量小麥基因組DNA，用適量的限制性內切酶消化完全（約5 U/mg DNA，酶切12 h左右），取少量電泳檢測酶切完全性；然后依次用酚：氯仿和氯仿：異戊醇抽提，乙醇沉淀。而后溶解在20 ml TE Buffer中；
2、在1%的瓊脂糖凝膠上電泳10~12 h，電壓為3 V/cm；
3、電泳完畢后，將膠轉入EB染色液中，染色10 min，紫外燈下檢測酶切結果；
4、將膠轉入500 ml 0.25N的HCl中，脫嘌呤15~30 min，直至溴酚藍變黃，用水洗一下；
5、0.4 N的NaOH處理20 min。與此同時，尼龍膜在超純水中潤濕后，在0.4 N的NaOH中泡5 min以上；
6、將凝膠翻轉后放在濾紙橋上，放上一張與凝膠大小相當的尼龍膜（Hybond-N+，Amarsharm），趕除氣泡，在膜上放3層濾紙，與尼龍膜大小相同，趕除氣泡，將凝膠周圍用膠片封好，放上大小相當的吸水紙，壓上約500
g的重物，轉膜10 h以上，其間更換吸水紙；
7、標記點樣孔一角，然后放在2×SSC中浸泡10 min，并進行輕微震蕩。用濾紙吸干，保鮮膜包好，置4 ℃存放備用；
8、利用HYBAID固相雜交儀進行預雜交、雜交。雜交瓶中根據膜面積大小，加入10~20 ml預雜交液，預熱到65 ℃，然后放入尼龍膜。65 ℃，預雜交5~6 h；
9、采用Takara公司Random primer DNA labeling kit進行探針標記，取適量待標記的DNA片段和Random
primer 2 ml，加入ddH2O至終體積14 ml，95 ℃變性3 min后立即冰浴5 min，瞬時離心。然后在此管中，依次加入：
| 10×buffer | 2.5 ml |
| dNTP Mixture | 2.5 ml |
| Klenow 酶 | 1 ml |
| α-32P-dCTP | 5 ml |
輕輕混勻，37 ℃反應30 min~1 h。然后65 ℃反應5 min，95 ℃反應3 min后迅速置于冰上冷卻；
10、將變性后的探針加到預雜交液中，繼續于65 ℃雜交約12 h； 11、用2×SSC/0.5% SDS洗膜液于65 ℃洗膜15 min，重復1次。然后，再用0.2×SSC/0.5% SDS洗膜液于65 ℃洗膜15 min，重復1次；
12、檢測雜交信號與背景情況，直至探測器探測的信號為10個counters左右，用濾紙吸干雜交膜，用保鮮膜包好，壓磷屏；
13、尼龍膜可以反復進行分子雜交，去除尼龍膜上原雜交探針的方法如下：將0.1×SSC/0.5% SDS洗液加熱到100
℃，放入雜交膜，在大于95 ℃條件下洗5 min，重復3次，將洗好的雜交膜放入2×SSC中漂洗5 min，濾紙吸干，保鮮膜包好，4 ℃存放。