小鼠免疫實驗_用電泳分離的抗原進行免疫

任意品系小鼠6～8 周

冷的 0.1 mol L KClPBS抗原完全和不完全弗氏佐劑

組織研磨機22－G 注射針頭帶塞的 3 ml 注射器雙頭帶塞的連接器無菌剪刀剃須刀片解剖刀片木制涂棒

1. 將含 10～50 μg 目的蛋白抗原的蛋白質混合物上樣于適當的 SDS 變性分離膠并電泳。

2. 將膠浸泡在冷的 0.1 mol/L 的 KCl 中 5～15 min。蛋白質條帶會在透明凝膠的背景下出現白色沉淀。用解剖刀或剃須刀切下合適的條帶。

3. 在組織研磨機中用最小量的 PBS 研磨凝膠條帶。確定連續加入 100 μl 直至研碎的凝膠條帶成為液體所需的最小體積。

4. 用包含 10～25μl 抗原的凝膠懸液 200～400 μl 腹腔注射免疫小鼠。

5. 3 周后用包含 10～25μl 抗原的凝膠懸液 200～400μl 腹腔注射強化免疫小鼠。

6. 采血，測定抗體滴度，進行細胞融合試驗（見基本方案步驟 4～8）。

重復用聚丙烯凝膠免疫小鼠會導致黏附，增加了分離脾臟的難度。