實驗概要
小鼠胚胎成纖維細胞傳代培養
主要試劑
0.05%Trypsin、細胞基礎培養液、DPBS
主要設備
100 mm培養皿、15 mL離心管、倒置顯微鏡
實驗步驟
（1）預先37℃溫熱細胞基礎培養液及0.05%Trypsin。
（2）用槍頭吸棄培養皿中的培養液，并用DPBS沖洗一遍，然后加入2 mL 0.05%Trypsin(100 mm培養皿)，37℃培養箱內孵育3min。
（3）顯微鏡下觀察細胞變圓、漂起，可加2 mL細胞基礎培養液終止消化。
（4）將細胞轉移到15 mL離心管中，室溫1000 r/min離心3 min，去上清。
（5）用6 mL細胞基礎培養液重懸細胞，按1:3比例接種至新的培養皿，補充培養液到100 mm培養皿，一般100 mm培養皿8 mL液體。
！注意：1. MEF傳代時密度應適當，不能過密，也不能過稀，密度適當的MEF可以按照1∶3的比例進行傳代。
2. 因為小鼠細胞易老化，制備飼養層細胞要求使用前三代的細胞。