實驗概要
小鼠胚胎成纖維細胞的原代培養
主要試劑
75%酒精、0.05%Trypsin、SP、DPBS、細胞基礎培養液
主要設備
35 mm培養皿、60 mm培養皿、100 mm培養皿、15 mL離心管、50 mL離心管、凍存管、眼科剪、眼科彎鑷、離心機
實驗材料
懷孕13.5天【將成年雌、雄小鼠放在同籠中飼養，使其自由交配，待成功交配后，以檢到陰道栓的時間記為懷孕0.5天（0.5dpc）。用滴管輕觸陰道口處，若有乳白色、固態膠狀物即陰道栓】的小鼠（CF1品系或ICR等品系【小鼠的品種和品系很多，是實驗動物中培育品系最多的動物。目前世界上常用的近交品系小鼠約有250多個，均具有不同特征。在干細胞培養中經常用到的小鼠品系有CD-1、ICR、C57BL/6等。CF1和ICR品系的小鼠產仔率高，性價比較高，并且CF1品系的小鼠來源的飼養層細胞適合培養人的胚胎干細胞。】）。
實驗步驟
（1）實驗準備：準備3個100 mm培養皿、2個60 mm培養皿、1個35 mm培養皿；分別加入10 mL、4 mL、1 mL未經預熱的含2%～3% SP的DPBS。準備眼科剪1把，眼科彎鑷2～3把（高壓滅菌或75%酒精中浸泡半小時以上消毒）。
（2）斷頸法【處死小鼠的常用方法之一。用單手按住小鼠頭部，另一支手握住小鼠尾部向后用力拉，至小鼠頸椎脫臼死亡。】處死13.5dpc小鼠,
打開腹腔，用虹膜剪和鑷子修去脂肪和系膜（用鑷子將子宮輕輕拉起，使系膜和脂肪張開，然后用虹膜剪緊貼子宮將系膜與子宮分離），從輸卵管根部及子宮下端分叉處剪下雙側子宮，將雙角子宮于陰道處剪斷。取出串珠樣的子宮，放在第一個100
mm皿中。
！注意：一定注意要無菌操作，小鼠處死后用75％的酒精噴濕全身，外用手術器械和內用的器械要分開使用，外用的剪皮與剪毛的手術器械分開使用，注意不要讓胚胎碰到小鼠皮毛。
（3）在第二個、第三個100 mm皿中洗去子宮表面附著的血污、脂肪結締組織等。
！注意：盡可能的把子宮洗干凈，不要殘留血跡。
（4）剪開子宮壁，逐個取出胚胎放在60 mm皿里。
（5）將胚胎去除胎膜、胎盤，或者撕破羊膜取出小鼠胎兒，放在60 mm皿里。
（6）去除小鼠頭、四肢、尾巴及內臟，將剩余組織放在35 mm皿中剪碎至1mm3大小。
！注意：一定要把頭與內臟去除干凈，防止神經細胞、血細胞等雜細胞污染。
（7）將剪碎的組織吸到15 mL離心管中，室溫1000 r/min離心3～5 min，去上清。
（8）加0.05%Trypsin（約一只胎鼠0.5 mL）消化組織約20 min，消化時可持續用槍頭吹打，待組織塊變小，組織液變混濁后，加入和Trypsin等量的細胞基礎培養液終止消化，室溫1000 r/min離心3 min。
（9）棄上清，加入8 mL細胞基礎培養液混勻，接種到100 mm皿中。一般一個胚胎接種到一個培養皿中，所用培養液為細胞基礎培養液。
（10）將接種的細胞放在培養箱中培養，待細胞密度達到90%左右即可傳代，一般2～3日可傳代。