材料
1X 無菌 PBS
Anti-human CD3:
Clone OKT3 (Functional Grade， eBioscience Cat. No. 16-0037) or Clone HIT3a (Functional Grade， eBioscience Cat. No. 16-0039)
RPMI-1640 完全培養基
無菌 PBMC
96孔平底帶蓋微孔板
MTT Buffer
MTT 裂解液
儀器用具
微量移液器或排槍
離心機
37°C, CO2 培養箱
96 孔板讀板機
實驗時間
30 分鐘制備 PBMCs
20 分鐘設置分析
2-4 天孵育
實驗步驟
1、 制備PBMCs并重懸于RPMI完全培養基中，濃度 1-2x106/ml。可根據實驗調整細胞濃度至 2-3x106/ml～105/ml。
2、 每孔加 100μl 細胞懸液，每種樣品做復孔。
3、 每孔加 100μl 可溶性抗體，優化抗體濃度。若使用分離的 T 細胞做增殖分析，推薦用 10μg/ml 抗體包被在 96 孔板上進行刺激。
4、 放置于潮濕的 37°C, 5% CO2 培養箱中。
5、 孵育 2-4 天。可根據具體的實驗進行優化。
6、 每孔加 20μl MTT buffer 再放回至培養箱中孵育 4 小時。
7、 每孔加 50μl MTT 裂解液，輕輕振蕩并孵育過夜。
8、 第二天 570nm 讀板。
9、 計算平均值和標準方差，作圖。
緩沖液和培養基
RPMI-1640 完全培養基：
900ml RPMI-1640
熱滅活的 100ml FBS（10%終濃度）
1ml 2-巰基乙醇
10ml L-谷氨酸鹽
抗生素混合物（可選）
MTT Buffer：
MTT 貯存液：溶于 1X PBS，濃度為 5mg/ml，避光保存
MTT 裂解液：
20% SDS 50% DMF
相關產品
廠商 | 目錄號 | 產品名稱(簡述) | 規格 | 目錄價 |
Liankebio | LK-MTT001 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 100assays | 150 |
LK-MTT002 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 200assays | 200 | |
LK-MTT005 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 500assays | 300 | |
LK-MTT010 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 1000assays | 500 | |
LK-CCK801 | Cell Counting Kit-8(CCK-8細胞增殖檢測試劑盒) | 100T | 200 | |
LK-CCK802 | Cell Counting Kit-8(CCK-8細胞增殖檢測試劑盒) | 200T | 360 | |
LK-CCK805 | Cell Counting Kit-8(CCK-8細胞增殖檢測試劑盒) | 500T | 600 | |
LK-CS0006 | Lipopolysaccharides(LPS)脂多糖 | 0.5mg | 90 | |
LK-CS0005 | CONCANAVALIN A(Con A)刀豆素A | 1mg | 90 | |
eBioscience | 85-16-0037-85 | Functional Grade Purified anti-human | 500 ug | 3,840 |
CD3 | ||||
85-16-0039-81 | Functional Grade Purified anti-human | 50 ug | 1,320 | |
CD3 | ||||
85-16-0039-85 | Functional Grade Purified anti-human | 500 ug | 3,840 | |
CD3 | ||||
85-16-0031-81 | Functional Grade Purified Hamster | 50 ug | 780 | |
anti-mouse CD3 (epsilon subunit; CD3e) | ||||
85-16-0031-82 | Functional Grade Purified Hamster | 100 ug | 1,440 | |
anti-mouse CD3 (epsilon subunit; CD3e)
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